ਇੱਕ ਅਲੋਸਟਰਿਕਲੀ ਜੋੜੀ ਜਾਂਚ ਦੇ ਨਾਲ ਓਪਨ Hv1 ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਚੈਨਲ ਦੇ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਇੰਟਰਫੇਸ ਦੀ ਪੁੱਛਗਿੱਛ

Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਤੁਹਾਡਾ ਧੰਨਵਾਦ। ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਵਿੱਚ CSS ਲਈ ਸੀਮਤ ਸਮਰਥਨ ਹੈ। ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ Internet Explorer ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਬੰਦ ਕਰੋ)।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਨਿਰੰਤਰ ਸਮਰਥਨ, ਅਸੀਂ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜਾਵਾ ਸਕ੍ਰਿਪਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਾਂਗੇ।
Hv1 ਵੋਲਟੇਜ-ਗੇਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਚੈਨਲ ਇੱਕ ਡਾਇਮੇਰਿਕ ਕੰਪਲੈਕਸ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਦੋ ਵੋਲਟੇਜ-ਸੈਂਸਿੰਗ ਡੋਮੇਨ (VSDs) ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਗੇਟਡ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਪਰਮੀਏਸ਼ਨ ਪਾਥਵੇਅ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਡਾਈਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਸਾਈਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਬੰਦ ਅਵਸਥਾ ਤੋਂ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੋਨੋ VSDs ਵਿੱਚ ਖੁੱਲੀ ਸਥਿਤੀ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਨਾਲ ਹੋਣ ਲਈ ਜਾਣੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ; ਹਾਲਾਂਕਿ, ਅੰਤਰੀਵ ਵਿਧੀਆਂ ਬਾਰੇ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਇੰਟਰਫੇਸ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਮੁੱਖ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ; ਹਾਲਾਂਕਿ, ਖੁੱਲੇ Hv1 ਚੈਨਲਾਂ ਵਿੱਚ ਅਜਿਹੇ ਇੰਟਰਫੇਸਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਇੱਥੇ ਅਸੀਂ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ 2-ਗੁਆਨੀਡਿਨੋਥਿਆਜ਼ੋਲ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੋ Hv1 VSDs ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਹਿਕਾਰੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੋਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਖੁੱਲੇ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਜਾਂਚ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਵਰਤਦੇ ਹਨ। ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ VSD ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਟਰਾਂਸਮੇਮਬਰੇਨ ਟੁਕੜੇ ਦਾ ਅੰਤ ਇੱਕ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਇੰਟਰਫੇਸ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਸਾਨੂੰ ਇਹ ਵੀ ਪੱਕਾ ਸਬੂਤ ਮਿਲਿਆ ਹੈ ਕਿ ਚੈਨਲ ਦਾ ਪ੍ਰੋਟੋਨ-ਸਿਲੈਕਟਿਵ ਫਿਲਟਰ ਬਲੌਕਰ-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। .
ਵੋਲਟੇਜ-ਗੇਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਚੈਨਲ ਫਾਈਟੋਪਲੈਂਕਟਨ ਤੋਂ ਮਨੁੱਖਾਂ ਤੱਕ, ਕਈ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਚੈਨਲ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਝਿੱਲੀ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਨੂੰ ਮੱਧਮ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ NADPH ਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਮਨੁੱਖਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਇੱਕ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਵੋਲਟੇਜ-ਗੇਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਚੈਨਲ। Hv1 ਹੈ, ਜੋ ਕਿ HVCN1 ਜੀਨ 2,3 ਦਾ ਉਤਪਾਦ ਹੈ। Hv1 (ਉਰਫ਼ VSOP) ਨੂੰ ਬੀ ਸੈੱਲ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ 4 ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਨਮਤ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ 5,6,7,8, ਸ਼ੁਕ੍ਰਾਣੂ ਸੈੱਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ 9 ਅਤੇ ਏਅਰਵੇਅ ਸਤਹ ਤਰਲ ਦਾ pH ਨਿਯਮ 10. ਇਹ ਚੈਨਲ ਕੈਂਸਰ ਦੀਆਂ ਕਿਸਮਾਂ ਵਿੱਚ ਕਈ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸਡ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬੀ-ਸੈੱਲ malignancies4,11 ਅਤੇ ਛਾਤੀ ਅਤੇ ਕੋਲੋਰੈਕਟਲ ਕੈਂਸਰ 12,13. ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ Hv1 ਗਤੀਵਿਧੀ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਮੈਟਾਸਟੈਟਿਕ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ 11, 12 .ਦਿਮਾਗ ਵਿੱਚ, Hv1 ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਦੁਆਰਾ, ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਇਸਕੇਮਿਕ ਸਟ੍ਰੋਕ ਦੇ ਮਾਡਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।
Hv1 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵੋਲਟੇਜ-ਸੈਂਸਿੰਗ ਡੋਮੇਨ (VSD) ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ S1 ਤੋਂ S414 ਨਾਮਕ ਚਾਰ ਟ੍ਰਾਂਸਮੇਮਬਰੇਨ ਹਿੱਸੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। VSD ਵੋਲਟੇਜ-ਗੇਟਿਡ Na+, K+ ਅਤੇ Ca2+ ਚੈਨਲਾਂ ਅਤੇ ਵੋਲਟੇਜ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਫਾਸਫੇਟੇਸ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ VSP ਤੋਂ ਸੰਬੰਧਿਤ ਡੋਮੇਨਾਂ ਨਾਲ ਮਿਲਦਾ ਜੁਲਦਾ ਹੈ। Ciona gutis15. ਇਹਨਾਂ ਹੋਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਵਿੱਚ, S4 ਦਾ C-ਟਰਮਿਨਸ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਕ ਮੋਡੀਊਲ, ਪੋਰ ਡੋਮੇਨ ਜਾਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। Hv1 ਵਿੱਚ, S4 ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਸਾਈਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਪਾਸੇ ਸਥਿਤ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ (CCD) ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। .ਚੈਨਲ ਇੱਕ ਡਾਇਮੇਰਿਕ ਕੰਪਲੈਕਸ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਦੋ VSDs ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਹਰ ਇੱਕ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਗੇਟਡ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਪਰਮੀਸ਼ਨ ਪਾਥਵੇਅ ਹੁੰਦਾ ਹੈ 16,17,18। ਇਹ ਦੋ Hv1 ਸਬ-ਯੂਨਿਟ 19,20,21,22 ਨੂੰ ਸਹਿਯੋਗੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖੋਲ੍ਹਣ ਲਈ ਪਾਏ ਗਏ ਸਨ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਅਤੇ ਇੰਟਰ-ਸਬਿਊਨਿਟ ਇੰਟਰਐਕਸ਼ਨ ਖੇਡਦੇ ਹਨ। ਗੇਟਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਹੈ। ਕੋਇਲਡ ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਦੋ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਡੋਮੇਨਾਂ ਦੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਢਾਂਚੇ ਉਪਲਬਧ ਹਨ 22,23। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਅੰਦਰ VSDs ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਝਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। Hv1-CiVSP ਚਾਈਮੇਰਿਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਬਣਤਰ ਇਸ ਇੰਟਰਫੇਸ ਬਾਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਕ੍ਰਿਸਟਲਾਈਜ਼ਡ ਚੈਨਲ ਕੰਪਲੈਕਸ ਦਾ ਟ੍ਰਾਈਮੇਰਿਕ ਸੰਗਠਨ ਖਮੀਰ ਲਿਊਸੀਨ ਜ਼ਿੱਪਰ GCN424 ਦੁਆਰਾ ਮੂਲ Hv1 CCD ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
Hv1 ਚੈਨਲ ਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਸੰਗਠਨ ਦੇ ਇੱਕ ਤਾਜ਼ਾ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਸਿੱਟਾ ਕੱਢਿਆ ਹੈ ਕਿ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਦੇ ਗੰਭੀਰ ਵਿਘਨ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਦੋ S4 ਹੈਲੀਸ CCD ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਲੰਬੇ ਹੈਲੀਸ ਜੋ ਝਿੱਲੀ ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸਾਈਟੋਪਲਾਜ਼ਮ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਜੈਕਟ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਸਿਸਟੀਨ ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ, ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ Hv1 VSDs S4 ਹਿੱਸੇ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ VSDs ਵਿਚਕਾਰ ਵਿਕਲਪਕ ਇੰਟਰਫੇਸਾਂ ਦਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵ ਕੀਤਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਇੰਟਰਫੇਸਾਂ ਵਿੱਚ S1 ਖੰਡ 17, 21, 26 ਅਤੇ S2 ਖੰਡ 21 ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਵਿਵਾਦ ਦਾ ਇੱਕ ਸੰਭਵ ਕਾਰਨ ਇਹਨਾਂ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਇਹ ਹਨ ਕਿ ਗੇਟਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਸਬੰਧ ਵਿੱਚ VSDs ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਬੰਦ ਅਤੇ ਖੁੱਲੀ ਅਵਸਥਾਵਾਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ VSDs ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਰਾਜਾਂ ਦੇ ਰੂਪਾਂਤਰ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ 2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋਥਿਆਜ਼ੋਲ Hv1 ਚੈਨਲਾਂ ਨੂੰ ਦੋ ਖੁੱਲੇ VSDs ਨਾਲ ਸੰਗਠਿਤ ਕਰਕੇ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਮਿਸ਼ਰਣ, 2-guanidinobenzothiazole (GBTA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਖੁੱਲੀ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਆਪਸੀ ਤਾਲਮੇਲ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਇੰਟਰਫੇਸ। ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਕਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਮਾਡਲ ਦੁਆਰਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦਰਸਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਇੱਕ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨੂੰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਕਰਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਆਸ ਪਾਸ ਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਂਝ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਪਾਇਆ ਕਿ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ D112, ਲਈ ਚੋਣਵੇਂ ਫਿਲਟਰ ਚੈਨਲ 27, ​​28 ਅਤੇ ਗੁਆਨੀਡੀਨ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ 29 ਦਾ ਹਿੱਸਾ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਸਹਿਕਾਰੀ ਬਾਈਡਿੰਗ Hv1 ਡਾਇਮਰ ਵਿੱਚ ਬਣਾਈ ਰੱਖੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ CCD S4 ਹਿੱਸੇ ਤੋਂ ਵੱਖ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ CCD ਵਿੱਚ ਇੰਟਰਸਬੁਨਿਟ ਇੰਟਰਫੇਸ ਸਿੱਧੇ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ। GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਨੂੰ ਮੱਧਮਾਨ ਕਰੋ। ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਅਸੀਂ ਦੇਖਦੇ ਹਾਂ ਕਿ S1 ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦੇਣ ਲਈ S4 ਹੈਲਿਕਸ ਦੇ ਬਾਹਰਲੇ ਸਿਰੇ ਦੇ ਨਾਲ ਨੇੜੇ ਦੇ VSDs ਦੀ ਵਿਵਸਥਾ ਦਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵ ਪੇਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ। S1 ਟੁਕੜਾ ਖੁੱਲੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
Hv1 ਦੇ ਛੋਟੇ ਅਣੂ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰਜ਼ ਐਂਟੀਕੈਂਸਰ ਦਵਾਈਆਂ ਅਤੇ ਨਿਊਰੋਪ੍ਰੋਟੈਕਟਿਵ ਏਜੰਟਾਂ ਵਜੋਂ ਉਪਯੋਗੀ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਅੱਜ ਤੱਕ, ਕੁਝ ਮਿਸ਼ਰਣ ਚੈਨਲ 30,31,32,33 ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਦੇ ਯੋਗ ਹੋਏ ਹਨ। . ਪਹਿਲਾਂ 200 μM (ਚਿੱਤਰ 1b) ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 'ਤੇ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਜਾਣ 'ਤੇ Hv1 ਨੂੰ ਲਗਭਗ 2GBI ਵਾਂਗ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੋਕਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਸੀਂ ਹੋਰ ਥਿਆਜ਼ੋਲ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੁਝ ਨੇ GBTA (ਚਿੱਤਰ 1 ਅਤੇ ਪੂਰਕ) ਨਾਲੋਂ ਸਮਾਨ ਜਾਂ ਵੱਧ ਸ਼ਕਤੀ ਵਾਲੇ ਚੈਨਲ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ। ਟੈਕਸਟ)। ਅਸੀਂ ਚਾਰ ਥਿਆਜ਼ੋਲ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ (GBTA ਅਤੇ ਮਿਸ਼ਰਣ [3], [6] ਅਤੇ [11], ਚਿੱਤਰ 1c) ਦੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਕਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ ਉਹ 2GBI ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਉੱਚੇ ਸਨ। ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ (h) ਥਿਆਜ਼ੋਲ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਸੀਮਾ 1.109 ± 0.040 ਤੋਂ 1.306 ± 0.033 (ਚਿੱਤਰ. 1c ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 1)। ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, 2GBI ਲਈ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ 0.975 ± 0.024 29, ਚਿੱਤਰ 2a ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 1 ਸੀ। 1 ਤੋਂ ਉੱਪਰ ਇੱਕ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਕਿਉਂਕਿ ਹਰੇਕ ਦੀ ਆਪਣੀ ਉਪ-ਅਨੁਬਿਟ ਵਿੱਚ Hv1 ਹੈ। ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ,29,32 ਅਸੀਂ ਤਰਕ ਕੀਤਾ ਕਿ ਥਿਆਜ਼ੋਲ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਦਾ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਅਣੂ ਦੇ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। GBTA ਸਭ ਤੋਂ ਉੱਚੇ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂ ਵਾਲਾ ਟੈਸਟ ਮਿਸ਼ਰਣ ਸੀ। ਇਸਲਈ, ਅਸੀਂ ਇਸ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਚੁਣਿਆ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਿੰਨਰਜੀ ਦੀ ਵਿਧੀ ਦਾ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸੰਦਰਭ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ 2GBI ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।
(a) ਟੈਸਟ ਮਿਸ਼ਰਣ: [1] ਹਵਾਲਾ Hv1 ਇਨਿਹਿਬਟਰ 2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-ਬੈਂਜ਼ੀਮੀਡਾਜ਼ੋਲ (2GBI)। 2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-ਬੈਂਜ਼ੋਥਿਆਜ਼ੋਲ (GBTA), [3] (5-ਟ੍ਰਾਈਫਲੋਰੋਮੀਥਾਈਲ-1,3-ਬੈਂਜ਼ੋਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-yl)ਗੁਆਨੀਡੀਨ, [4] ਨੈਫਥੋ[1,2-d][1, 3] ਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-yl -guanidine, [5](4-methyl-1,3-thiazol-2-yl)guanidine, [6](5-bromo-4-methyl-1,3-thiazol-2-yl)guanidine, [7] famotidine, [8] 2-guanidino-5-methyl-1,3-thiazole-4-carboxylic acid ethyl ester, [9] 2-guanidino-4-methyl Ethyl-1,3-thiazole-5-carboxylate, [10 ](2-guanidino-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)ethyl acetate, [11]1-[4-(4 -Chlorophenyl)-1,3-thiazol-2-yl]guanidine, [ 12]1-[4-(3,4-ਡਾਇਮੇਥੋਕਸਾਈਫੇਨਾਇਲ)-1,3-ਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-yl]ਗੁਆਨੀਡਾਈਨ। (ਬੀ) ਸੰਕੇਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਗੁਆਨੀਡੀਨੋਥਿਆਜ਼ੋਲਜ਼ ਅਤੇ ਸੰਦਰਭ ਮਿਸ਼ਰਣ 2ਜੀਬੀਆਈ (ਨੀਲੀ-ਹਰੇ ਬਾਰ) ਦੁਆਰਾ ਮਨੁੱਖੀ Hv1 ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ। .Hv1 ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਕਰੰਟਾਂ ਨੂੰ -80 mV ਤੋਂ +120 mV ਦੀ ਹੋਲਡਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ ਤੋਂ depolarization ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ Xenopus oocytes ਦੇ ਅੰਦਰ-ਬਾਹਰ ਪਲੇਕਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਹਰੇਕ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨੂੰ 200 μM.pHi = pHo = 6.0 ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 'ਤੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। .ਡੇਟਾ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ±SEM (n≥4)।(c) ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੁਆਰਾ ਮਨੁੱਖੀ Hv1 ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਨਿਰਭਰ ਰੋਕਥਾਮ [2], [3], [6] ਅਤੇ [11]। ਹਰੇਕ ਬਿੰਦੂ 3 ਦੇ ਔਸਤ ਰੋਕ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। 15 ਮਾਪ ਤੱਕ. ਲਾਈਨ ਇੱਕ ਹਿੱਲ ਫਿੱਟ ਹੈ ਜੋ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1 ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਸਪੱਸ਼ਟ Kd ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਚਿੱਤਰ 1 ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਫਿੱਟਾਂ ਤੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ: h(1) = 0.975 ± 0.024 h(2) = 1.306 ± 0.033, h(3) = 1.25 ± 0.07, h(6) = 1.109 ± 0.040, h (11) = 1.179 ± 0.036 (ਵਿਧੀਆਂ ਦੇਖੋ)।
(a,b) ਮਿਸ਼ਰਣ 2GBI ਅਤੇ GBTA ਨੇ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਨਿਰਭਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਡਾਇਮੇਰਿਕ ਅਤੇ ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ Hv1 ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਹੈ। ਹਰੇਕ ਬਿੰਦੂ 3 ਤੋਂ 8 ਮਾਪਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ਰੋਕ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਰਵ ਇੱਕ ਹਿੱਲ ਫਿੱਟ ਹੈ। ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ (h) ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਨਸੈੱਟ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਪੂਰਕ ਅੰਕ 3 ਅਤੇ 4 ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਫਿੱਟਾਂ ਤੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। (a) ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ GBTA ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਚਿੱਤਰ 1c ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ। ਪ੍ਰਤੱਖ Kd ਮੁੱਲਾਂ ਲਈ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1 ਦੇਖੋ। (c) ਦਾ ਮਾਡਲਿੰਗ GBTA ਦੀ dimeric Hv1 ਲਈ ਸਹਿਕਾਰੀ ਬਾਈਡਿੰਗ। ਠੋਸ ਕਾਲੀ ਲਾਈਨ ਸਮੀਕਰਨ (6) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਡੇਟਾ ਲਈ ਫਿੱਟ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ (d) ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਬਾਈਡਿੰਗ ਮਾਡਲ ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਬ 1 ਅਤੇ ਸਬ 2 ਲੇਬਲ ਵਾਲੀਆਂ ਡੈਸ਼ਡ ਲਾਈਨਾਂ ਬਾਇਮੋਲੇਕਿਊਲਰ ਐਸੋਸੀਏਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਪਹਿਲੀ ਅਤੇ ਦੂਜੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਘਟਨਾਵਾਂ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੰਤੁਲਨ ਵਕਰ (ਉਪ 1: OO + B ⇄ BO*, Kd1 = 290 ± 70 μM; ਉਪ 2: BO* + B ⇄ B*O*, Kd2 = 29.3 ± 2.5 μM .(d) Hv1 ਬਲਾਕ ਦੀ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਵਿਧੀ ਦਾ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਚਿੱਤਰ। GBTA ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਖੁੱਲੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਬੰਧਨ ਨਾਲ ਨੇੜੇ ਦੇ ਖੁੱਲੇ ਸਬਯੂਨਿਟ (Kd2 Hv1 ਚੈਨਲਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ N- ਅਤੇ C-ਟਰਮੀਨਲ cytoplasmic ਡੋਮੇਨਾਂ ਨੂੰ Ciona Intestinalis ਵੋਲਟੇਜ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਫਾਸਫੇਟੇਸ CiVSP (Hv1NCCiVSP) 18,34 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨਾਲ ਬਦਲ ਕੇ ਮੋਨੋਮਰਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ Hv1NCCiVSP) 18,34. ਅਸੀਂ ਇਨਿਹਿਬਸ਼ਨ ਅਤੇ HGB2GTA ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨਿਰਭਰਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਹੈ। ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਡਾਈਮੇਰਿਕ ਚੈਨਲ (ਵਾਈਲਡ-ਟਾਈਪ) ਇਨਿਬਿਸ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 2a,b) ਨਾਲ ਕੀਤੀ। ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਦੋ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ Hv1 ਵਿੱਚ ਖਤਮ ਹੋ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸ ਵਿਆਖਿਆ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਧਦੀ ਹੈ। ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਲਈ ਦੂਜੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੀ ਸਾਂਝ। ਅਸੀਂ ਤਰਕ ਕੀਤਾ ਕਿ ਇੱਕ Hv1 ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ (fit35 ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਨਾ) ਦੇ ਪੁਨਰਗਠਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੀ ਖਾਲੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਦੇ ਪੁਨਰਗਠਨ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰੇਗੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਸਬੰਧ
ਚੈਨਲ ਲਈ GBTA ਦੀ ਸਹਿਕਾਰੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਦਾ ਗਿਣਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਣਨ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਮਾਡਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸਬਯੂਨਿਟ ਇੱਕ ਵਿਭਾਜਨ ਸਥਿਰ Kd1 (Fig. 2c, Sub 1, OO+ B ⇆ BO*) ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਬਾਇਮੋਲੇਕਿਊਲਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪਹਿਲੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਅਣੂ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਬਾਈਡਿੰਗ ਚੈਨਲ ਨੂੰ ਅਜਿਹੀ ਅਵਸਥਾ ਅਪਣਾਉਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਖਾਲੀ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ ਇੱਕ ਵਿਭਾਜਨ ਸਥਿਰ Kd2 ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਬਾਇਮੋਲੇਕਿਊਲਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਬਾਅਦ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨਾਲ ਜੁੜ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜਿੱਥੇ Kd2 ਚਿੱਤਰ 2c ਵਿੱਚ ਠੋਸ ਕਾਲੀ ਲਾਈਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸੰਘਣਤਾ-ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਕਰ ਲਈ ਮਾਡਲ ਸਮੀਕਰਨ ਦਾ ਫਿੱਟ ਹੈ, ਜੋ ~290 μM ਦਾ Kd1 ਅਤੇ ~29 μM ਦਾ ਇੱਕ Kd2 (ਤਰੀਕਿਆਂ ਦਾ ਭਾਗ, ਸਮੀਕਰਨ (6)) ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਮਾਡਲ ਵੀ ਵਰਣਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। 2GBI ਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ, ਜਿੱਥੇ Kd2 ≈ Kd1 = Kd (Fig. 2d)। ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ Hv1 ਵਿੱਚ, ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਅਤੇ ਇੱਕ Kdm (O° + B ⇆ B°) ਹੈ। GBTA ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ, Kdm ਲਗਭਗ 54 ਹੈ। μM, ਜੋ Kd2 (Fig. 2d) ਨਾਲੋਂ Kd1 ਨਾਲ ਵਧੇਰੇ ਮਿਲਦਾ ਜੁਲਦਾ ਹੈ। ਦੂਜੇ ਸ਼ਬਦਾਂ ਵਿੱਚ, ਮੋਨੋਮਰ ਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਇੱਕ ਸੰਰਚਨਾ (O°) ਵਿੱਚ ਉੱਚ-ਅਨੀਅਤ ਅਵਸਥਾ (BO*) ਨਾਲ ਮਿਲਦੀ-ਜੁਲਦੀ ਹੈ। ਡਾਇਮਰ ਦੀ ਐਫੀਨਿਟੀ ਸਟੇਟ (OO), ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਦੇ ਖਾਤਮੇ ਦੇ ਕਾਰਨ।
ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ 2GBI32 ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ GBTA ਨੇ Hv1 ਕਰੰਟ ਨੂੰ ਦਬਾ ਦਿੱਤਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਚੈਨਲ ਖੁੱਲ੍ਹਦਾ ਸੀ, ਨਾ ਕਿ ਇਸਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣਾ ਔਖਾ ਬਣਾ ਕੇ (ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਚਿੱਤਰ 2a,b,d)। ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਰੀਪੋਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ, ਪਰ ਇਹ ਵਰਤਾਰਾ GBTA (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2c) ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। 2GBI ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ Hv1 ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, ਹਰੇਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਵਿੱਚ ਗੇਟ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਬੰਦ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੇ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਬਲੌਕਰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਛੱਡਦਾ (“ ਫੁੱਟ ਗੇਟ” ਮਕੈਨਿਜ਼ਮ), ਅਤੇ 2ਜੀਬੀਆਈ ਫਾਟਕ ਬੰਦ ਹੋਣ ਨਾਲੋਂ ਹੌਲੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਇੱਕ ਐਚਵੀ1 ਸਬਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਅਨਬਲੌਕ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬੰਦ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਬਲੌਕ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ, ਬਾਕੀ ਬਚੇ 2ਜੀਬੀਆਈ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਅਨਬਾਈਡਿੰਗ ਹੌਲੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (ਬਲੌਕਰ ਕੈਪਚਰ)। ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਚੱਲਣ ਵਾਲੇ ਚੈਨਲ ਸਪੀਸੀਜ਼। ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਬਲਾਕਡ ਸਬਯੂਨਿਟ ਬੰਦ ਹੋਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਨੂੰ ਅਸਥਾਈ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚਲਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਸੜ ਰਹੇ ਪੂਛ ਦੇ ਕਰੰਟ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ ਕਿ GBTA (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2c) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ Hv1 ਟੇਲ ਕਰੰਟਸ ਦੇ ਸੜਨ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹੌਲੀ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸ ਬਲੌਕਰ (Fig. 2d) ਲਈ ਇੱਕ ਸਿਨਰਜਿਸਟਿਕ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਿਧੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ। ਇੱਕ ਵਾਰ ਜਦੋਂ ਇੱਕ GBTA ਅਣੂ Hv1 ਸਬਯੂਨਿਟ ਤੋਂ ਅਨਬਾਉਂਡ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। , ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਬਲੌਕਰ ਦੀ ਸਾਂਝ ਲਗਭਗ 10 ਗੁਣਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਅਣਬਾਈਡਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਾ ਪੱਖ ਪੂਰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ GBTA ਦੇ ਦੂਜੇ ਅਣੂ ਦੇ ਚੈਨਲ ਵਿੱਚ ਫਸਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਦੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਰਹਿਣ ਵਾਲੀਆਂ ਚੈਨਲ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਜੋ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਬਲਾਕਿੰਗ ਸਬਯੂਨਿਟ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਨਾਲ 2GBI ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨਾਲੋਂ GBTA ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਭਰਪੂਰ ਹੋਣ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਤੇਜ਼ ਪੂਛ ਮੌਜੂਦਾ ਸੜਨ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
GBTA ਨੂੰ ਦੋਨਾਂ Hv1 ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਨਾਲ ਸਹਿਯੋਗੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬੰਨ੍ਹਣ ਲਈ, ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਨੂੰ ਅਲੋਸਟਰਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਹਰੇਕ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਇਸ ਦੇ ਯੋਗ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ: 1) ਇਵੈਂਟਸ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਨਾ ਜੋ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਨੇੜੇ ਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ ਨਾਲ ਸੰਚਾਰ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ 2) ਵਿਚੋਲਗੀ ਲੋਅ-ਐਫੀਨਿਟੀ ਤੋਂ ਹਾਈ-ਐਫੀਨਿਟੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ। ਅਸੀਂ ਤਰਕ ਕੀਤਾ ਕਿ ਜੇਕਰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਦੇ ਅੰਦਰਲੇ ਖਾਸ ਖੂੰਹਦ ਸਹਿਕਾਰੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੂੰ Hv1.Residues D112, F150 ਦੇ GBTA ਰੋਕ ਦੇ ਸੰਘਣਤਾ-ਜਵਾਬ ਕਰਵ ਦੇ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਨੂੰ ਬਦਲਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। , S181 ਅਤੇ R211 ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ 2GBI29 ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਅਸੀਂ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਸੀ ਕਿ ਉਹ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ (ਚਿੱਤਰ 3A) ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋਣਗੇ। ਅਸੀਂ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਚੈਨਲਾਂ D112E, F150A, S1811 ਲਈ GBTA ਦੇ ਨਿਰੋਧਕ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਜਵਾਬ ਕਰਵ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਹੈ। , ਅਤੇ R211S (ਚਿੱਤਰ 3) ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ Hv1 ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਲੋਕਾਂ ਨਾਲ ਕੀਤੀ, 2GBI ਨੂੰ ਇੱਕ ਸੰਦਰਭ ਵਜੋਂ ਵਰਤਦੇ ਹੋਏ। ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ V109 S1 ਹਿੱਸੇ ਦੇ ਉਸੇ ਚਿਹਰੇ 'ਤੇ D112 ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੇ ਅੰਦਰ ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਹੈਲੀਕਲ ਮੋੜ ਹੈ। V109 2GBI29 ਦੇ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਸੀ, ਅਸੀਂ V109A ਮਿਊਟੈਂਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ (ਚਿੱਤਰ. 3ਬੀ).
(a) guanidine ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਸੁਝਾਏ ਗਏ Hv1 ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ। ਡੈਸ਼ਡ ਨੀਲੇ ਕਰਵ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਸਾਈਡ ਚੇਨਾਂ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਮਿਸ਼ਰਣ 2GBI29 ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਗੂੜ੍ਹਾ ਲਾਲ) ਹਰ ਬਿੰਦੂ 3 ਤੋਂ 12 ਮਾਪਾਂ ± SD V109 ਦੇ ਮੱਧਮ ਰੋਕ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਕਰਵ ਪ੍ਰਤੱਖ Kd ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਿੱਲ ਫਿੱਟ ਹਨ (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1 ਦੇਖੋ)। ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ (h) ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਨਸੈੱਟ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਪੂਰਕ ਅੰਜੀਰ 3 ਅਤੇ 4 ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਫਿੱਟਾਂ ਤੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। Hv1 WT ਲਈ ਸੰਦਰਭ h ਮੁੱਲ ਡੈਸ਼ਡ ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ। ਤਾਰੇ ਮਿਉਟੈਂਟ ਅਤੇ ਡਬਲਯੂਟੀ ਪੈਸਿਆਂ ਵਿੱਚ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਪੀ ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ D112E ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੇ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ (p ਇਹ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ ਕਿ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਲਈ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ Hv1 ਡਾਈਮਰ ਵਿੱਚ 1 ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ ਅਤੇ ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ ਚੈਨਲ (ਚਿੱਤਰ 2b) ਵਿੱਚ ~1 ਬਣ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਦੋ ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ। ਕੇਸ, GBTA ਦਾ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ ਡਾਇਮਰ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਜਿਸ ਨਾਲ ਬਲੌਕਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ~1 ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਸ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਨੂੰ Hv1 F150A-WT ਲਿੰਕਡ ਡਾਇਮਰ (ਚਿੱਤਰ 4a) ਵਿੱਚ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ F150A ਦਾ ਸਬੰਧ GBTA ਲਈ ਸਬਯੂਨਿਟ WT ਸਬਯੂਨਿਟ (Figs. 1c ਅਤੇ 3d) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ 2 ਆਰਡਰ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੀ। ਅਸੀਂ ਫਿਰ 2 μM GBTA ਦੀ ਬੇਸਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ WT ਸਬਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਵ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ। , ਬਲੌਕਰ ਤੋਂ F150A ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੇ ਲਗਭਗ 99% ਅਤੇ WT ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੇ (a) ਬਲਾਕਿੰਗ ਹੈਮੀਚੈਨਲ ({F150A}b-WT/BAO*) ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ F150A-WT ਜੰਕਸ਼ਨ ਡਾਇਮਰ ਦਾ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਚਿੱਤਰ। ਸਫੇਦ ਹੀਰੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। BAO* ਅਤੇ BA*B* ਰਾਜਾਂ ਵਿੱਚ, F150A ਸਬਯੂਨਿਟ ਦਾ ਸਬੰਧ WT ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਹੋਣ ਦੀ ਉਮੀਦ ਹੈ। (b) −80 mV ਤੋਂ +120 mV.pHi = pHo = 6.0 ਤੱਕ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ F150A-WT ਚੈਨਲਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਕਰੰਟ .ਗ੍ਰੇ ਟਰੇਸ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਮਾਪੀਆਂ ਗਈਆਂ ਕਰੰਟਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਬਲੈਕ ਟਰੇਸ (ਕੰਟਰੋਲ) 2 μM GBTA ਦੇ ਜੋੜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਕਰੰਟ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ, WT ਸਬਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਰੋਕਿਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ F150A ਸਬਯੂਨਿਟ ਲਗਭਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ GBTA ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ। ({F150A}b-WT)। GBTA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਹੋਰ ਵਾਧੇ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ WT ਸਬਯੂਨਿਟ (ਸੰਤਰੀ ਅਤੇ ਲਾਲ ਰੰਗ ਦੇ ਨਿਸ਼ਾਨ) ਦੀ ਰੁਕਾਵਟ ਪੈਦਾ ਹੋਈ। F150A ਸਬਯੂਨਿਟ)। ਹਰੇਕ ਬਿੰਦੂ 3 ਤੋਂ 7 ਮਾਪਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ਰੋਕ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਵਕਰ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1 ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਸਪੱਸ਼ਟ Kd ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਿੱਲ ਫਿੱਟ ਸਨ। ਇਨਸੈੱਟ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਕ ਅੰਜੀਰ 3 ਅਤੇ 4 ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਫਿਟਸ ਤੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। Hv1 WT ਦੇ h ਮੁੱਲ ਹਨ ਡੈਸ਼ਡ ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਤਾਰੇ WT ਡਾਈਮਰ Hv1 (ਪੀ ਕਿਉਂਕਿ ਓਪਨ ਚੈਨਲ ਵਿੱਚ Hv1 ਦੇ GBTA ਰੋਕ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਸੀਂ ਤਰਕ ਕੀਤਾ ਕਿ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਖੁੱਲੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਕਪਲਿੰਗ ਦੀ ਵਿਧੀ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਦੋ Hv1 ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਸਹਿਕਾਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ 19,20,21, 22 ਅਤੇ ਗੇਟਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਕਪਲਿੰਗ ਨੂੰ ਸਾਈਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ (CCD) 22,25 ਦੁਆਰਾ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਨ ਦੀ ਤਜਵੀਜ਼ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਪੁੱਛਿਆ ਕਿ ਕੀ ਸੀਸੀਡੀ ਵੀ ਓਪਨ ਸਟੇਟ ਵਿੱਚ GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਜੋੜਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸੀਨ। S4 ਟ੍ਰਾਂਸਮੇਮਬ੍ਰੇਨ ਫਰੈਗਮੈਂਟ ਅਤੇ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ 'ਤੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਪਹਿਲਾਂ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਇਸ ਡੋਮੇਨ ਨੂੰ ਬਾਕੀ ਚੈਨਲਾਂ ਤੋਂ ਡਿਕਪਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ ਅਤੇ ਡਾਇਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਿਆ ਜਾ ਸਕੇ। ਇਸਲਈ, ਅਸੀਂ ਪਰਿਵਰਤਨ V220G, K221G ਅਤੇ T222G (ਚਿੱਤਰ) ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। । ਦੋ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ ਇਕੱਠੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ, ਪਰ CCD ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।
(a) ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ (ਨੀਲੇ ਤੀਰ) ਦੁਆਰਾ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕੀਤੀ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਕਪਲਿੰਗ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ S4 ਦੇ ਅੰਦਰਲੇ ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਈਗਲਾਈਸਿਨ ਮਿਊਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ Hv1 ਡਾਇਮਰ ਦਾ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਚਿੱਤਰ। ਸੰਕੇਤਿਤ ਪਰਿਵਰਤਨ, ਸਬ-ਯੂਨਿਟ (ਨੀਲੇ ਤੀਰ) ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਜੋੜਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ S1 ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। (c–h) 2GBI (ਸਯਾਨ) ਅਤੇ GBTA (ਗੂੜ੍ਹਾ ਲਾਲ) ਸੰਕੇਤਕ ਸੰਰਚਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਨਿਰਭਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਹਰੇਕ ਬਿੰਦੂ ਔਸਤ ਰੁਕਾਵਟ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। 3 ਤੋਂ 10 ਮਾਪਾਂ ਦਾ ± SD। ਕਰਵ ਇੱਕ ਹਿੱਲ ਫਿੱਟ ਸੀ ਜੋ ਪ੍ਰਤੱਖ Kd ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1 ਦੇਖੋ)। ਇੰਟਰਪੋਲੇਟਡ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮਾਂ ਵਿੱਚ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਢੰਗ ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਅੰਕ 3 ਅਤੇ 4 ਦੇਖੋ) ਲਈ ਸੰਦਰਭ h ਮੁੱਲ। Hv1 WT ਨੂੰ ਡੈਸ਼ਡ ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਤਾਰੇ ਮਿਊਟੈਂਟ ਅਤੇ ਡਬਲਯੂਟੀ ਪੈਸਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਪੀ ਕਿਉਂਕਿ ਅਸੀਂ CCD ਨੂੰ GBTA ਸਹਿਕਾਰੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਵਿਚੋਲੇ ਵਜੋਂ ਰੱਦ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਪੁੱਛਿਆ ਕਿ ਕੀ VSDs ਵਿਚਕਾਰ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਅਲੋਸਟਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਨੂੰ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ D112 (ਚਿੱਤਰ 3c) ਦੇ ਰੂੜੀਵਾਦੀ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੁਆਰਾ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। S1 transmembrane ਹਿੱਸੇ ਵਿੱਚ।S1 ਵਿੱਚ ਦੋ ਹੋਰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਚਾਰਜ ਵਾਲੇ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ ਹਨ, E119 ਅਤੇ D123, D112 ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਹੈਲਿਕਸ ਦੇ ਉਸੇ ਪਾਸੇ ਸਥਿਤ ਹਨ, ਪਰ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰੇ 24 ਦੇ ਨੇੜੇ ਹਨ। ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਅਣੂ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਸਿਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ ਨੇ ਸੰਕੇਤ ਦਿੱਤਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ। ਵਾਟਰਲਾਈਨਜ਼ 36,37 ਰਾਹੀਂ D112 ਤੱਕ। ਇਸਲਈ, ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ E119 ਅਤੇ D123 GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ (Fig. 5b) ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ, ਅਸੀਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਚਾਰਜ ਵਾਲੀ ਸਥਿਤੀ K125 ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ, ਜੋ ਕਿ D123 ਦੇ ਨੇੜੇ ਸਥਿਤ ਹੈ। ਪਰ S1 ਹੈਲਿਕਸ ਦੇ ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ (ਚਿੱਤਰ 5b)।
ਅਸੀਂ 2GBI ਅਤੇ GBTA ਦੁਆਰਾ E119A, D123A ਅਤੇ K125A ਚੈਨਲਾਂ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਨਿਰਭਰ ਰੋਕ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ E119A ਅਤੇ K125A ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੇ ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ (p > 0.05, Fig 5d) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੇ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ। ). ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਪਰਿਵਰਤਨ D123A ਨੇ GBTA (p 0.05/14)।
ਕਿਉਂਕਿ ਦੋਵੇਂ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ 'ਤੇ ਸਥਿਤੀ 123 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਨੂੰ ਬੇਅਸਰ ਕਰਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਪਰਿਵਰਤਨ ਹੋਇਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਦੋਵਾਂ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਨੂੰ ਉਲਟਾਉਣ ਦਾ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਜਿਹਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਸੀ, ਅਸੀਂ ਚਾਰਜ ਦੇ ਉਲਟ ਚੈਨਲ ਦੇ ਨਾਲ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ। C-ਟਰਮੀਨਲ ਸਬਯੂਨਿਟ (ਚਿੱਤਰ 5b) ਵਿੱਚ D123R ਬਦਲ ਦੇ ਨਾਲ Hv1-ਲਿੰਕਡ ਡਾਈਮਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ GBTA ਅਤੇ 2GBI ਦੁਆਰਾ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ-ਜਵਾਬ ਰੋਕ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ। ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ WT-D123R ਚੈਨਲਾਂ ਨਾਲੋਂ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਦਾ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ। ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ Hv1 (p ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਪਾਇਆ ਕਿ D112E ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੇ WT-D123R ਪਿਛੋਕੜ (Fig. 5b,h ਅਤੇ ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਚਿੱਤਰ 4) ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਹੈ। 2GBI ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੇ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਵੀ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ( ਚਿੱਤਰ 5h ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 3)। ਇਹ ਖੋਜਾਂ ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ ਕਿ ਸਥਿਤੀ 123 'ਤੇ ਉਲਟ ਚਾਰਜਾਂ ਕਾਰਨ ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਵਧੀ ਹੋਈ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਜੋੜੀ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਅਨੁਵਾਦ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਸਥਿਤੀ D112 'ਤੇ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਪਰੇਸ਼ਾਨ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਤਰਕ ਕੀਤਾ ਕਿ ਜੇਕਰ ਨੇੜੇ ਦੇ ਖੁੱਲੇ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ 'ਤੇ D123 ਦੇ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਨਾਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨੇੜੇ ਸਨ, ਤਾਂ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਚਾਰਜਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਸ਼ੀਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਆਰਜੀਨਾਈਨ ਵਿੱਚ ਐਸਪਾਰਟਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਬਦਲ ਦੁਆਰਾ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਅਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਚਾਰਜਾਂ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾਵੇਗਾ। ਉਹਨਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਆਕਰਸ਼ਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆ। ਇੱਕ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ (WT-D123R ਡਾਈਮਰ)। ਆਕਰਸ਼ਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ S1 ਫਰੈਗਮੈਂਟ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਨੂੰ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਅਤੇ GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਧਦੀ ਹੈ।
ਇਸ ਪਰਿਕਲਪਨਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ S1 ਖੰਡ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਨੂੰ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਕਰਨ ਦਾ ਇੱਕ ਤਰੀਕਾ ਲੱਭਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਸਥਿਤੀ 123 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਸਵਿਚਿੰਗ ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਹੈ। ਲੀ ਐਟ ਅਲ. Hv1 ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ I127 ਤੋਂ ਸਿਸਟੀਨ ਦਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਪਹਿਲਾਂ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸਵੈ-ਚਾਲਤ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ 17। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Hv1-CiVSP ਚਾਈਮੇਰਿਕ VSD ਦਾ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਬਣਤਰ ਸੰਕੇਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ I127 ਨੂੰ S1 ਹੈਲਿਕਸ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰੇ ਤੋਂ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ24। ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਪੁੱਛਿਆ ਕਿ ਕੀ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਸਹਿ-ਸਹਿਯੋਗੀ ਬਾਂਡ ਦਾ ਗਠਨ ਪੋਜੀਸ਼ਨ 127 'ਤੇ ਸਿਸਟੀਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​S1-S1 ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੋਣ ਦੀ ਉਮੀਦ ਹੈ, ਦਾ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ 'ਤੇ ਉਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸਥਿਤੀ 123 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਦੇਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਅਸੀਂ 10 mM β-mercaptoethanol (βME) (Fig. 6a) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ GBTA ਅਤੇ 2GBI ਦੁਆਰਾ Hv1 I127C ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ-ਨਿਰਭਰ ਰੋਕ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ। ਏਜੰਟ ਨੂੰ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ (WT-I127C) ਵਿੱਚ ਸਿਸਟੀਨ ਸਬਸਟੀਟਿਊਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਲਿੰਕਡ ਡਾਇਮਰ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ (ਚਿੱਤਰ 6a) ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਸੀਂ ਸਵੈ-ਚਾਲਤ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਦੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਵਿੱਚ ਅਸਮਰੱਥ ਸੀ। 2GBI ਰੋਕ 'ਤੇ I127C ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ, ਕਿਉਂਕਿ βME ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ, Hv1 ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਲਈ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ, ਮੋਨੋਸਾਈਸਟਾਈਨ ਬਦਲੇ ਗਏ ਡਾਈਮਰਾਂ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਖਰਾ ਸੀ। ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ WT-I127C (ਚਿੱਤਰ 6b ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 3) ਨੂੰ ਵੱਖਰਾ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਅਸੀਂ GBTA ਇਨਿਬਿਸ਼ਨ 'ਤੇ ਸਵੈ-ਚਾਲਤ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਕ੍ਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਦੇ ਨਾਟਕੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਹੈ। abs ਵਿੱਚ Hv1 I127C ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਣ ਲਈ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ (ਕਰਾਸਲਿੰਕ ਚਾਲੂ) βME (ਕਰਾਸਲਿੰਕ ਬੰਦ) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਾਂ ਡਾਈਮਰ (ਕਰਾਸਲਿੰਕ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ) (ਚਿੱਤਰ 6c ਅਤੇ ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਚਿੱਤਰ 4) ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ WT-127C ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ S1 ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਡਾਈਸਲਫਾਈਡ ਬਾਂਡਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਦੁਆਰਾ ਬਹੁਤ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸਾਡੀ ਵਿਆਖਿਆ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ WT-D123R ਡਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਸਥਿਤੀ 123 'ਤੇ ਅਸਪਾਰਟੇਟ ਅਤੇ ਅਰਜੀਨਾਈਨ ਦੇ ਆਕਰਸ਼ਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਵਧੇ ਹੋਏ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਸਬ ਯੂਨਿਟ
ਓਪਨ-ਸਟੇਟ ਕਪਲਿੰਗ ਨੂੰ ਦੋ ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿੱਚ S1 ਖੰਡ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਿੱਧੀ ਭੌਤਿਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੁਆਰਾ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
(a) ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ Hv1 ਡਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਲਿੰਕਰ ਡਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਨੁਮਾਇੰਦਗੀ, ਇਹ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਕਿ ਕਿਵੇਂ ਇੰਟਰਸਬੁਨਿਟ ਸਿਸਟੀਨ ਕਰਾਸਲਿੰਕਸ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। (bd) 2GBI (b,d) ਅਤੇ GBTA (c, e) ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਘੋਲ ਵਿੱਚ 10 mM βME ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਜਾਂ ਗੈਰਹਾਜ਼ਰੀ ਵਿੱਚ। ਹਰੇਕ ਬਿੰਦੂ 3 ਤੋਂ 10 ਮਾਪਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ਰੋਕ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਕਰਵ Kd ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਪਹਾੜੀ ਫਿੱਟ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1 ਦੇਖੋ)। ਇਨਸੈੱਟ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮਾਂ ਵਿੱਚ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਫਿਗਸ 3 ਅਤੇ 4 ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਫਿਟਸ ਤੋਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। (c,e) ਵਿੱਚ ਤਾਰੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਵੱਖ-ਵੱਖ GBTA ਰੋਕ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ (p 0.05)।
ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਪਾਇਆ ਕਿ βME ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ, D112E I127C Hv1 ਡਾਇਮਰ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ GBTA ਦਾ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਘੱਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਏਜੰਟਾਂ (ਚਿੱਤਰ 6e ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 4) ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ, ਜਿਸਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਕਿ D112E ਪਰਿਵਰਤਨ। ਨੇ ਸਿਸਟੀਨ 127 ਦੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਖਤਮ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ। D112E, I127C Hv1 ਡਾਈਮਰਾਂ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ 2GBI ਦਾ ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਵੀ D112E ਪਰਿਵਰਤਨ (ਚਿੱਤਰ 1) 6d ਅਤੇ ਸਪਲੀਮੈਂਟ ਦੁਆਰਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ ਸੀ। ਚਿੱਤਰ 3).
ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਇਹ ਖੋਜਾਂ ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ ਕਿ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਆਕਰਸ਼ਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੁਆਰਾ ਆਸ ਪਾਸ ਦੇ Hv1 ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿੱਚ S1 ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਆਪਸੀ ਤਾਲਮੇਲ ਦੁਆਰਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਬਦਲੇ ਗਏ ਸਿਸਟੀਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਕੋਵਲੈਂਟ ਬਾਂਡਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਦੁਆਰਾ ਸਾਈਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਧਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਨਤੀਜਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਕਿ ਸਹਿਕਾਰੀਤਾ 'ਤੇ ਆਕਰਸ਼ਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਪਰਿਵਰਤਨ D112E ਦੁਆਰਾ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਕੋਵੇਲੈਂਟ ਬਾਂਡ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ।
ਐਚਵੀ1 ਚੈਨਲਾਂ ਲਈ ਗੁਆਨੀਡੀਨ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਨੂੰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਕਰਨ ਲਈ ਉਪਲਬਧ ਰਸਾਇਣਕ ਸਪੇਸ ਦੀ ਸਾਡੀ ਖੋਜ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ GBTA ਵਰਗੇ 2-guanidinothiazoles ਵਿੱਚ 2-guanidinobenzimidazoles (Fig. 1c) ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਤਵੱਜੋ ਨਿਰਭਰਤਾ ਹੈ। ਅਤੇ ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ ਚੈਨਲ (Fig. 2a,b) ਅਤੇ ਡਾਈਮੇਰਿਕ ਚੈਨਲ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਇਨਿਹਿਬਟਰ (ਚਿੱਤਰ 4) ਨਾਲ ਪੂਰਵ-ਬੰਨ੍ਹਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ, ਨੇ ਸਾਨੂੰ ਇਹ ਸਿੱਟਾ ਕੱਢਣ ਲਈ ਅਗਵਾਈ ਕੀਤੀ ਕਿ GBTA ਦੁਆਰਾ Hv1 ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਕਿਰਿਆ ਇੱਕ ਸਹਿਯੋਗੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਦੋ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿੱਚ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀਆਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਅਲੋਸਟਰਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਹ ਖੋਜ ਜੋ GBTA ਓਪਨ ਚੈਨਲ ਨਾਲ ਜੁੜਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਿਸ਼ਰਣ 2GBI32 ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਦਾ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਓਪਨ ਸਟੇਟ ਵਿੱਚ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਸਾਡਾ ਸਹਿਕਾਰੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਮਾਡਲ GBTA (Fig. 2c) ਦੁਆਰਾ Hv1 ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਦਾ ਗਿਣਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਣਨ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਰੀਪੋਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੈਨਲ ਟੇਲ ਕਰੰਟਸ ਦੇ ਸੜਨ 'ਤੇ 2GBI ਅਤੇ GBTA ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ, ਜੋ ਬਾਈਡਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਸਾਡੀ ਵਿਆਖਿਆ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਿੱਲ ਗੁਣਾਂਕ ਜੋ ਦੋ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ Hv1) ​​ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ 2. ਅਸੀਂ 1.31 ਦੇ ਗੁਣਾਂਕ ਦੇ ਨਾਲ Hv1 ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਲਈ GBTA ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ, ਜੋ Hv1 I127C ਵਿੱਚ 1.88 ਹੋ ਗਿਆ। ਸਿਨਰਜਿਸਟਿਕ ਮੁਕਤ ਊਰਜਾ, ਸਭ ਤੋਂ ਘੱਟ ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਉੱਚੀ ਸਾਂਝ ਵਾਲੀਆਂ ਸਾਈਟਾਂ (ਵਿਧੀਆਂ ਵੇਖੋ) ਦੀਆਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਮੁਕਤ ਊਰਜਾਵਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ Hv1 ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ 1.3 kcal/mole ਅਤੇ Hv1 I127C ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ 2.7 kcal/ਮੋਲ ਸੀ। ਬਾਈਡਿੰਗ ਆਕਸੀਜਨ ਤੋਂ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ ਦੀ ਸਹਿਯੋਗੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਮਸ਼ਹੂਰ ਅਤੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਾਲ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਉਦਾਹਰਨ ਹੈ38। ਮਨੁੱਖੀ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ (ਚਾਰ ਅਲੋਸਟਰਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜੀਆਂ ਗਈਆਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਟੈਟਰਾਮਰ) ਲਈ, ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ 2.5-3.0 ਤੱਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦਾ ਮੁੱਲ 1.26 ਤੋਂ 3.64 ਤੱਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। kcal/mol, ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ38. ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਗਲੋਬਲ ਐਨਰਜੀਟਿਕਸ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ, GBTA ਨਾਲ Hv1 ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੀ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਓ2 ਦੀ ਹੀਮੋਗਲੋਬਿਨ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਖਰੀ ਨਹੀਂ ਹੈ ਜਦੋਂ ਦੋ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੰਖਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਸਾਡੇ ਤਾਲਮੇਲ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ, GBTA ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਬਾਈਡਿੰਗ ਕਰਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਆਸ ਪਾਸ ਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਂਝ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਘਟਨਾ (ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਫਿਟ) ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦਾ ਪੁਨਰ ਪ੍ਰਬੰਧ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ। ਇਹਨਾਂ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ, ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ ਆਪਣੀਆਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸਖ਼ਤ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, S1 aspartate D112 ਵਧੇ ਹੋਏ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਬੰਧਾਂ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਦੇ ਪੁਨਰ ਪ੍ਰਬੰਧ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ।D112 ਪਹਿਲਾਂ Hv1 ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਪਰਮੀਏਸ਼ਨ ਪਾਥਵੇਅ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਅਤੇ ਚੋਣਵੇਂ ਫਿਲਟਰ 27,28 ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਦੋ Hv1 ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿੱਚ ਚੋਣਵੇਂ ਫਿਲਟਰ ਖੁੱਲੇ ਰਾਜ ਵਿੱਚ ਅਲੋਸਟਰਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜੇ ਗਏ ਹਨ। ਚਿੱਤਰ 7a GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਦੀ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਸਥਿਤੀ ਅਤੇ Hv1 VSD ਅਧਾਰਤ ਯੋਜਨਾਬੱਧ 'ਤੇ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ D112, D123, K125 ਅਤੇ I127 ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ। Hv1-CiVSP chimera ਦੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਢਾਂਚੇ 'ਤੇ। S1 ਦੇ ਬਾਹਰਲੇ ਕੋਸ਼ੀਕਾ ਵਾਲੇ ਸਿਰੇ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਲਈ ਸੁਝਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ ਕਾਲੇ ਤੀਰਾਂ ਨਾਲ ਦਿਖਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ।
(a) Hv1 VSD ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ। Hv1-CiVSP ਚਾਈਮੇਰਾ ਦੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਢਾਂਚੇ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਹੈਲੀਕਲ ਖੰਡਾਂ ਨੂੰ ਬੇਲਨਾਕਾਰ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਸੰਰਚਨਾ ਵਿੱਚ, S4 ਖੰਡ ਦਾ ਅੰਦਰਲਾ ਸਿਰਾ CCD (ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ) ਨਾਲ ਮਿਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਬਾਊਂਡ GBTA ਦੀਆਂ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਥਾਵਾਂ ਸਲੇਟੀ ਅੰਡਾਕਾਰ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ। ਕਾਲੇ ਤੀਰ ਦੋ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਮਾਰਗ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਜਾਂਚ ਕੀਤੇ ਗਏ S1 ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਰੰਗਦਾਰ ਗੋਲਿਆਂ ਨਾਲ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡਾਈਮਰ ਸੰਰਚਨਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਪਲੇਨ ਦੇ ਬਾਹਰਲੇ ਪਾਸੇ ਤੋਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਖੱਬੇ ਪੈਨਲ 'ਤੇ, ਡਾਈਮਰ ਇੰਟਰਫੇਸ S4 ਹੈਲਿਕਸ ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਦੋ VSDs ਦਾ 20 ਡਿਗਰੀ ਘੜੀ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਧੁਰੀ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਘੁੰਮਣਾ, ਇਸ ਦੇ ਨਾਲ ਦੋ S4 ਹੈਲੀਸ (ਡੈਸ਼ਡ ਐਰੋਜ਼) ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨਾ, ਸੱਜੇ ਪਾਸੇ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਪ੍ਰਬੰਧ ਨੂੰ ਉਤਪੰਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਸੰਰਚਨਾ ਵਿੱਚ, ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਸਬ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ D123 ਅਤੇ I127 ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਨੇੜੇ ਆਉਣ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। (c) CiVSP VSD ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧਤਾ 4G80 ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਢਾਂਚੇ ਵਿੱਚ ਪਾਈ ਗਈ ਡਾਇਮਰ ਸੰਰਚਨਾ ਵਿੱਚ। CiVSP ਵਿੱਚ ਸਥਿਤੀ P140 Hv1 ਵਿੱਚ ਸਥਿਤੀ D123 ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੀ ਹੈ।
ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ 123 (123D/123D ਜਾਂ 123R/123R) ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਸ਼ੀਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਖੁੱਲੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ GBTA-ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਦੇ "ਆਮ" ਪੱਧਰ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ ਅਤੇ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਆਕਰਸ਼ਿਤ (123D/123R) ਵਿੱਚ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। , ਵਧਿਆ ਸਹਿਯੋਗ (Fig. 5g)। ਇਹ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਅਲਾਨਾਈਨ ਬਦਲ ਦੇ ਨਾਲ ਘਿਣਾਉਣੀ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਨਾਲ ਵੀ ਸਹਿਯੋਗ ਵਧੇਗਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ, 123A/123A ਡਾਇਮਰ ਦੀ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਵੇਖੀ ਗਈ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 5e)। ਇੱਕ ਸੰਭਵ ਹੈ। ਸਪੱਸ਼ਟੀਕਰਨ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਹਾਈਡ੍ਰੋਫਿਲਿਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿੱਚ ਹਾਈਡ੍ਰੋਫੋਬਿਕ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਨੂੰ ਰੱਖਣ ਦਾ ਅਸਥਿਰ ਪ੍ਰਭਾਵ D123 ਅਵਸ਼ੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਘਿਰਣਾਤਮਕ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਦੇ ਕਾਰਨ ਸਥਿਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਹਿਕਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਸਮੁੱਚੀ ਕਮੀ ਆਈ ਹੈ। ਸੀਓਨਾ ਗੁਟਿਸ Ci-Hv1 (ਮਨੁੱਖੀ Hv1 ਵਿੱਚ D123 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ) ਦੀ ਸਥਿਤੀ D171 ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਹੋਣ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਧਾਰਨਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ D123 ਖੁੱਲੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਹਾਈਡ੍ਰੋਫਿਲਿਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿੱਚ ਸਥਿਤ ਹੈ।
Hv1 ਚੈਨਲਾਂ ਦਾ ਗੇਟਿੰਗ ਕਈ ਪਰਿਵਰਤਨ 19,20,26,39,40,41 ਦੁਆਰਾ ਵਾਪਰਨ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। Qiu et al26 ਨੇ ਪਾਇਆ ਕਿ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਡੀਪੋਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ 'ਤੇ, Ci-Hv1 ਦੇ ਵੋਲਟੇਜ ਸੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਬਦਲਾਅ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਚੈਨਲ ਨੂੰ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਛੱਡ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਪਰ ਫਿਰ ਵੀ ਬੰਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। , ਇਸਦੇ ਬਾਅਦ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰੋਟੋਨਾਂ ਨੂੰ ਦੋਨਾਂ ਸਬ-ਯੂਨਿਟ ਮਾਰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਚਾਲਨ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ। ਵੋਲਟੇਜ ਸੈਂਸਰ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਤਬਦੀਲੀ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਵੋਲਟੇਜ-ਕੈਂਪ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਇਹ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਕਿ ਦੂਜੀ ਤਬਦੀਲੀ ਨੂੰ D171 ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੁਆਰਾ ਚੋਣਵੇਂ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪਰੇਸ਼ਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਗੜਬੜੀ, ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਤਬਦੀਲੀ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂਕ ਦੇ ਨਾਲ ਕਿਸੇ ਬਿੰਦੂ 'ਤੇ ਨੇੜੇ ਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ D171 ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਵਿਆਖਿਆ ਸਾਡੀ ਖੋਜ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ ਕਿ D123 ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਖੁੱਲੀ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਤੇ GBTA ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦਾ ਹੈ।
Fujiwara et al25 ਨੇ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਸਾਇਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਕੋਇਲਡ-ਕੋਇਲ ਡੋਮੇਨ ਦਾ ਡਾਇਮਰ ਇੰਟਰਫੇਸ ਦੋ S4 ਹੈਲੀਸ (ਚਿੱਤਰ 7b, ਖੱਬਾ ਪੈਨਲ) ਰੱਖਣ ਲਈ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚ ਫੈਲਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਇਸ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਇੱਕ ਮਾਡਲ ਸਿਸਟੀਨ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਵਰਿੰਗ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ। S4 ਹੈਲਿਕਸ ਅਤੇ CCD ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਵਾਲੇ ਖੇਤਰ ਦਾ ਸਮੁੱਚਾ VSD ਅਤੇ ਕਾਰਜਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। ਇੱਕ ਟ੍ਰਾਂਸਮੇਮਬਰੇਨ pH ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ, Hv1 ਚੈਨਲਾਂ ਨੂੰ ਖੁੱਲਣ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਝਿੱਲੀ ਡੀਪੋਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਿਸਟੀਨ ਕਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਉਹਨਾਂ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਪਰਦੀ ਹੈ ਜਿੱਥੇ ਚੈਨਲ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬੰਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ S4-S4 ਇੰਟਰਫੇਸ ਸੰਭਾਵਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਆਫ-ਸਟੇਟ ਸਬਯੂਨਿਟ ਸੰਰਚਨਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਗੇਟਿੰਗ 17,21,26 ਦੌਰਾਨ ਇੰਟਰਸਬਿਊਨਿਟ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ S1 ਅਤੇ S2 ਦੀ ਸ਼ਮੂਲੀਅਤ ਦੇ ਸਬੂਤ ਲੱਭੇ ਹਨ ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਚੈਨਲ ਖੁੱਲ੍ਹੇ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਬਯੂਨਿਟ ਸੰਰਚਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਅਪਣਾ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਬੰਦ ਅਵਸਥਾਵਾਂ, ਮੋਨੀ ਐਟ ਅਲ ਦੀਆਂ ਖੋਜਾਂ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਇੱਕ ਵਿਚਾਰ। S1 ਗੇਟਿੰਗ ਦੌਰਾਨ 39 ਮੂਵ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ, ਖੁੱਲ੍ਹੀ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ, S1 ਹੈਲਿਕਸ ਦੇ ਬਾਹਰਲੇ ਸਿਰੇ ਸਿੱਧੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨੇੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਐਲੋਸਟੈਰਿਕ ਕਪਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ S4-S4 ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਡਾਇਮਰ ਕੌਂਫਿਗਰੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ, S1 ਹੈਲਿਕਸ ਬਹੁਤ ਦੂਰ ਹਨ। ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਸਮਤਲ ਦੇ ਲੰਬਵਤ ਇੱਕ ਧੁਰੇ ਦੇ ਦੁਆਲੇ ਦੋ VSD ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੀ ਇੱਕ 20° ਘੜੀ ਦੀ ਦਿਸ਼ਾ ਵਿੱਚ ਰੋਟੇਸ਼ਨ, ਦੋ S4 ਹੈਲਿਸਾਂ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰਿਆਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਦੇ ਨਾਲ, ਇੱਕ S1-S1 ਸੰਰਚਨਾ ਇੱਕਸਾਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸਾਡੀਆਂ ਖੋਜਾਂ (ਚਿੱਤਰ 7b, ਸੱਜਾ ਪੈਨਲ) ਦੇ ਨਾਲ। ਅਸੀਂ ਖੁੱਲ੍ਹੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਚੈਨਲ ਲਈ ਇਸ ਸੰਰਚਨਾ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।
ਹਾਲਾਂਕਿ ਸੀਆਈਵੀਐਸਪੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਇੱਕ ਮੋਨੋਮਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਨ ਬਾਰੇ ਸੋਚਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸਦੇ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ VSD ਦੀ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਬਣਤਰ ਇੱਕ ਡਾਈਮਰ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਕੈਪਚਰ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਡਾਈਮਰ ਵਿੱਚ S1 ਹੈਲੀਸ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਸਿਰੇ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਸਮੁੱਚੀ ਸੰਰਚਨਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਸਮਾਨ ਹੈ। Hv1 (Fig. 7c) ਲਈ। CiVSP ਡਾਈਮਰ ਵਿੱਚ, ਨੇੜੇ ਦੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਤੋਂ ਸਭ ਤੋਂ ਨਜ਼ਦੀਕੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ 140 (ਚਿੱਤਰ 7c) ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਸੀ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, CiVSP ਵਿੱਚ P140 Hv1 ਵਿੱਚ D123 ਸਥਿਤੀ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ। Hv1 ਵਿਚਕਾਰ ਸਬਯੂਨਿਟ ਸੰਰਚਨਾ ਵਿੱਚ ਸਮਾਨਤਾ। ਅਤੇ CiVSP ਡਾਇਮਰਸ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਇਹਨਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਦੇ VSDs ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਇੰਟਰਫੇਸ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਅੰਦਰੂਨੀ ਰੁਝਾਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜਿੱਥੇ S1 ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਕੋਸ਼ਿਕ ਸਿਰੇ ਇੰਟਰਫੇਸ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਸ਼ੁਕ੍ਰਾਣੂ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ Hv1 ਦੀ ਜ਼ਰੂਰੀ ਭੂਮਿਕਾ ਇਸ ਚੈਨਲ ਨੂੰ ਮਰਦਾਂ ਦੀ ਉਪਜਾਊ ਸ਼ਕਤੀ ਦੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਲਈ ਇੱਕ ਆਕਰਸ਼ਕ ਦਵਾਈ ਦਾ ਟੀਚਾ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵਿੱਚ Hv1 ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਇਸਕੇਮਿਕ ਸਟ੍ਰੋਕ ਤੋਂ ਰਿਕਵਰੀ ਨੂੰ ਵਿਗੜਦਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਛਾਤੀ 12 ਜਾਂ ਕੋਲੋਰੇਕਟਲ ਕੈਂਸਰ 13 ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਬਚਾਅ ਅਤੇ ਬੀ-ਸੈੱਲ ਖ਼ਰਾਬ 11 ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਣ ਲਈ ਸੋਚਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ।ਇਸ ਲਈ, Hv1 ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਛੋਟੀਆਂ ਅਣੂ ਵਾਲੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ ਨੂੰ ਨਿਊਰੋਪ੍ਰੋਟੈਕਟਿਵ ਏਜੰਟ ਜਾਂ ਐਂਟੀਕੈਂਸਰ ਥੈਰੇਪਿਊਟਿਕਸ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਓਪਨ Hv1 ਸਬਯੂਨਿਟ, ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਬੰਧਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹੋਏ, Hv1 ਚੈਨਲਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਵਧੇਰੇ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਦਵਾਈਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਮਾਨਵੀ Hv1 ਦੀ ਸਾਈਟ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਤ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲਤਾ ਮਿਆਰੀ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। Hv1NCCiVSP ਨਿਰਮਾਣ ਵਿੱਚ, Hv1 ਦੇ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ 1-96 ਅਤੇ 228-273 ਨੂੰ CiVSP18 ਦੇ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ 1-113 ਅਤੇ 240-576 ਨਾਲ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਦਾ ਸੀ-ਟਰਮਿਨਸ ਦੂਜੇ ਸਬਯੂਨਿਟ ਦੇ N-ਟਰਮਿਨਸ ਨਾਲ GGSGGSGGSGSGSGGSGG ਲਿੰਕਰ ਦੁਆਰਾ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। pGEMHE ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਨੂੰ Nhe1 ਜਾਂ Sph1 ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮਜ਼ (ਨਿਊ ਇੰਗਲੈਂਡ ਬਾਇਓਲੈਬਸ) ਨਾਲ ਰੇਖਾਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ RNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। T7 mMessage mMachine ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਕਿੱਟ (Ambion)। ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਮਾਪਾਂ ਤੋਂ 1-3 ਦਿਨ ਪਹਿਲਾਂ, cRNA ਨੂੰ Xenopus oocytes (50 nl ਪ੍ਰਤੀ ਸੈੱਲ, 0.3-1.5 μg/μl) ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। Xenopus laevis (NASCO) ਤੋਂ ਪੜਾਅ V ਅਤੇ VI oocytes ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਈਕੋਸਾਈਟ ਬਾਇਓਸਾਇੰਸ ਤੋਂ। ਆਰਐਨਏ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ND96 ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 96 mM NaCl, 2 mM KCl, 1.8 mM CaCl, 1 mM MgCl, 10 mM HEPES, 5 mM ਪਾਈਰੂਵੇਟ, 100 μH 100 μH7 °Cing/8 ਐੱਮ. .
2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-ਬੈਂਜ਼ਿਮੀਡਾਜ਼ੋਲ[1], 2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-ਬੈਂਜੋਥਿਆਜ਼ੋਲ[2], (4-ਮਿਥਾਈਲ-1,3-ਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-yl)ਗੁਆਨੀਡੀਨ [5], (5-ਬ੍ਰੋਮੋ-4 -ਮਿਥਾਇਲ-1,3 -ਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-ਵਾਈਐਲ)ਗੁਆਨੀਡੀਨ) [6], ਐਥਾਈਲ 2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-5-ਮਿਥਾਇਲ-1,3-ਥਿਆਜ਼ੋਲ-4-ਕਾਰਬੋਕਸਾਈਲੇਟ [8], ਈਥਾਈਲ 2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-4- ਮਿਥਾਇਲ-1,3-ਥਿਆਜ਼ੋਲ- 5-ਕਾਰਬੋਕਸੀਲੇਟ [9] ਅਤੇ (2-ਗੁਆਨੀਡੀਨੋ-4-ਮਿਥਾਈਲ-1,3-ਥਿਆਜ਼ੋਲ-5-yl) ਐਥਾਈਲ ਐਸੀਟੇਟ [10] ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ ਤੋਂ ਸਨ। ਫੈਮੋਟੀਡੀਨ [7] ਐਮਪੀ ਬਾਇਓਮੈਡੀਕਲਜ਼ ਤੋਂ ਸੀ।1-[4 -(4-ਕਲੋਰੋਫੇਨਾਇਲ)-1,3-ਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-yl]ਗੁਆਨੀਡੀਨ[11] ਅਤੇ 1-[4-(3,4-ਡਾਈਮੇਥੋਕਸਾਈਫੇਨਾਇਲ)-1,3- ਥਿਆਜ਼ੋਲ-2-yl]ਗੁਆਨੀਡੀਨ [12] ਸੀ ਮੈਟਰਿਕਸ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਤੋਂ। ਇਹ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਪਾਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੇ ਹਨ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ 100 ਐਮਐਮ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸੁੱਕੇ DMSO ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਫਿਰ ਲੋੜੀਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਰਿਕਾਰਡਿੰਗ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਿਸ਼ਰਣ 3 ਅਤੇ 4 ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਘੱਟੋ ਘੱਟ 99% ਸ਼ੁੱਧਤਾ.
2-ਅਮੀਨੋ-4- (ਟ੍ਰਾਈਫਲੂਰੋਮੀਥਾਈਲ) ਬੈਂਜ਼ੇਨੇਥਿਓਲ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਲੋਰਾਈਡ (1.02 ਗ੍ਰਾਮ, 4.5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) ਦੇ 25 ਮਿ.ਲੀ. ਜਲਮਈ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਲੋਰਿਕ ਐਸਿਡ (2.5 ਐਨ) ਦੇ ਮੁਅੱਤਲ ਕਰਨ ਲਈ ਠੋਸ ਡਾਈਸਾਈਡਿਆਮਾਈਡ (380 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ, 4.5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ), ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਮਾਈਟਰੈਕਸ ਹੈਟਰੋਲਗ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਹਿਲਾਉਣ ਨਾਲ ਰੀਫਲਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਠੰਡਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 10N ਪੋਟਾਸ਼ੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਜੋੜ ਕੇ ਬੇਅਸਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਬਣਨ ਵਾਲੇ ਸਫੈਦ ਪਰੀਪੀਟੇਟ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਠੰਡੇ ਪਾਣੀ (3 × 50 ਮਿ.ਲੀ.) ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇੱਕ ਓਵਨ ਵਿੱਚ ਸੁੱਕਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ( 65 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ) ਕਈ ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ ਚਿੱਟਾ ਠੋਸ (500 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ, 48%) ਦੇਣ ਲਈ ਈਥਾਈਲ ਐਸੀਟੇਟ/ਪੈਟਰੋਲੀਅਮ ਈਥਰ ਤੋਂ ਰੀਕ੍ਰਿਸਟਾਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; mp 221–222 °C (ਹਲਕਾ 225–226 °C) 45; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 7.25 (ਬਹੁਤ ਵਿਆਪਕ s, 4 H), 7.40 (d, 1 H, J = 8.1 Hz), 7.73 (s, 1 H), 7.92 (d , 1 H, J = 8.1 Hz। 13C NMR (200 MHz, DMSO-d6): δ = 114.2 (d, J = 3.5 Hz), 117.5 (d, J = 3.5 Hz), 121.7, 124.6 (q, J) = 272 Hz), 126.1 (q, J = 272 Hz) = 31.6 Hz), 134.8, 152.1, 158.4, 175.5.HRMS (ESI): m/z ਗਣਿਤ ਮੁੱਲ। C9H8F3N4S (M + Hz) ਲਈ (M + Hz, 16+ ਲੱਭਿਆ: 40) : 261.0419.
Naphtho[1,2-d]thiazol-2-amine (300 mg, 1.5 mmol), ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਸੰਸਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਨੂੰ ਇੱਕ ਛੋਟੀ ਟੈਸਟ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਤੇਲ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ 200 °C ਤੱਕ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 300 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ (ਵੱਡਾ ਵਾਧੂ) ਸਾਇਨਾਮਾਈਡ ਅਤੇ 1.0 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਕੰਕ. ਗਰਮ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਲੋਰਿਕ ਐਸਿਡ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਤੇਲ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ, ਜਿਸ ਦੌਰਾਨ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪਾਣੀ ਵਾਸ਼ਪੀਕਰਨ ਹੋ ਗਿਆ। ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਤੇ ਠੰਡਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਠੋਸ ਸਮੱਗਰੀ ਛੋਟੇ-ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਤੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਫ਼ਿੱਕੇ ਪੀਲੇ ਅਮੋਰਫਸ ਠੋਸ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। (38 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ, 10%) mp 246-250 °C; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6, D2O): δ [ppm] = 7.59 (t, 1 H, J = 8.2 Hz), 7.66 (t, 1 H, J = 8.3 Hz), 7.77 (d, 1 Hz) , J = 8.6 Hz), 7.89 (d, 1 H, J = 8.6 Hz), 8.02 (d, 1 H, J = 8.2 Hz), 8.35 (d, 1 H, J = 8.3 Hz).13C NMR (150) MHz, DMSO-d6: δ = 119.9, 122.7, 123.4, 123.6, 126.5, 127.1, 128.7, 132.1, 140.7, 169.1.HRMS (ESI): m/z. 0699 , ਪਾਇਆ: 243.0704.
ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਕਰੰਟਾਂ ਨੂੰ oocytes ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਅਤੇ ਬਾਹਰੀ ਪੈਚਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ pClamp10 ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ Axon Digidata 1440A (ਮੌਲੀਕਿਊਲਰ ਡਿਵਾਈਸਿਸ) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਇੱਕ Axopatch 200B ਐਂਪਲੀਫਾਇਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਨਿਰਮਾਣਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ) ਐਥੇਨੇਸਲਫੋਨਿਕ ਐਸਿਡ (ਐਮਈਐਸ), 30 ਐਮਐਮ ਟੈਟਰਾਇਥਾਈਲਾਮੋਨੀਅਮ (ਟੀਈਏ) ਮੇਸੀਲੇਟ, 5 ਐਮਐਮ ਟੀਈਏ ਕਲੋਰਾਈਡ, 5 ਐਮਐਮ ਈਥੀਲੀਨ ਗਲਾਈਕੋਲ-ਬੀਸ(2-ਐਮੀਨੋਇਥਾਈਲ)-N,N,N',N'-ਟੈਟਰਾਏਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ (EGTA), ਨੂੰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ TEA ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਦੇ ਨਾਲ pH 6.0। ਸਾਰੇ ਮਾਪ 22 ± 2 °C 'ਤੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਪਹੁੰਚ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ 1.5–4 MΩ ਹੈ। ਮੌਜੂਦਾ ਟਰੇਸ ਨੂੰ 1 kHz 'ਤੇ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, 5 kHz 'ਤੇ ਨਮੂਨਾ ਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਲੈਂਪਫਿਟ 10.2 (ਡੀਵਾਈਸ ਮੋਲਕੂਲਰ) ਨਾਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ) ਅਤੇ Origin8.1 (OriginLab)।
Hv1 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲੇ ਹੱਲ ਅਤੇ ਕੁਝ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ 10 mM βME ਨੂੰ ਇੱਕ VC-6 ਪਰਫਿਊਜ਼ਨ ਵਾਲਵ ਸਿਸਟਮ (ਵਾਰਨਰ ਇੰਸਟਰ.) ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਮੈਨੀਫੋਲਡ ਦੁਆਰਾ ਗੁਰੂਤਾ ਦੁਆਰਾ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ pClamp ਸੌਫਟਵੇਅਰ TTL (ਟ੍ਰਾਂਜ਼ਿਸਟਰ-) ਦੁਆਰਾ ਪਾਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਰਾਂਜ਼ਿਸਟਰ ਲੋਜਿਕ) ਸਿਗਨਲ। ਇੱਕ ਪੈਚ ਪਾਈਪੇਟ ਦੇ ਸਾਹਮਣੇ 360 μm ਵਿਆਸ ਡਿਲੀਵਰੀ ਟਿਪ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਮਲਟੀ-ਟਿਊਬ ਪਰਫਿਊਜ਼ਨ ਪੈਨਸਿਲ (ਆਟੋਮੇਟ ਵਿਗਿਆਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਤੇਜ਼ ਪਰਫਿਊਜ਼ਨ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਚੈਨਲ ਰੋਕ ਨੂੰ ਆਈਸੋਕ੍ਰੋਨਲ ਐਂਪਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਮਾਪਾਂ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। +120 mV ਡੀਪੋਲਰਾਈਜ਼ਿੰਗ ਪਲਸ। ਜੀਵੀ ਮਾਪ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ 18,20। ਟੇਲ ਕਰੰਟ -20 mV ਤੋਂ +120 mV ਤੱਕ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵੋਲਟੇਜਾਂ 'ਤੇ ਡੀਪੋਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਕਦਮਾਂ ਤੋਂ ਬਾਅਦ -40 mV 'ਤੇ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਹੋਰ ਨਹੀਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ। ਟੈਸਟ ਪਲਸ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਨਬਜ਼ ਹੈ। ਮੌਜੂਦਾ ਸੜਨ ਲਈ ਠੀਕ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ 18 .ਜੀਵੀ ਗ੍ਰਾਫ ਬੋਲਟਜ਼ਮੈਨ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਫਿੱਟ ਕਰਦਾ ਹੈ:
ਚੈਨਲਾਂ ਅਤੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ 1) ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਸੰਜੋਗਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੱਖ ਵਿਘਨ ਸਥਿਰਤਾ (Kd) ਨੂੰ ਹਿੱਲ ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ ਨਾਲ ਰੋਕ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨਿਰਭਰਤਾ (ਮਤਲਬ % inhib ਮੁੱਲ) ਨੂੰ ਫਿੱਟ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ:
ਜਿੱਥੇ [I] ਇਨਿਹਿਬਟਰ I ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੈ ਅਤੇ h ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਹੈ। ਪਹਾੜੀ ਗੁਣਾਂਕ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ, ਸਮੀਕਰਨ (2) ਨੂੰ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪੁਨਰ ਵਿਵਸਥਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ: