Ածխածնային քվանտային կետեր զեբրաձկան ֆլուորեսցենտային պատկերման համար

Շնորհակալություն nature.com այցելելու համար: Ձեր օգտագործած դիտարկիչի տարբերակը սահմանափակ աջակցություն ունի CSS-ին: Լավագույն փորձի համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել ավելի նոր բրաուզեր (կամ անջատել համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer-ում): Միևնույն ժամանակ, շարունակական աջակցություն ապահովելու համար, մենք ցուցադրում ենք կայքը առանց ոճերի և JavaScript-ի։
Ածխածնի քվանտային կետերը (C-QD) դառնում են իդեալական փոխարինող մետաղի վրա հիմնված QD-ի և ներկող զոնդերի համար՝ շնորհիվ իրենց բարձր կենսահամատեղելիության, ցածր թունավորության, հեշտ պատրաստման և յուրահատուկ ֆոտոֆիզիկական հատկությունների: Այստեղ մենք նկարագրում ենք զեբրաձկան լյումինեսցենտային բիոպատկերումը, օգտագործելով C-QD-ները որպես զոնդեր՝ C-QD-ների պատրաստման, զեբրաձկան բուծման, սաղմերի հավաքման և C-QD-ների սաղմերի և թրթուրների մեջ ընկղմման և միկրոներարկման միջոցով ներմուծման տեսանկյունից: C-QD-ի պլեոխրոիզմը ստուգվել է զեբրաձկան սաղմերը պատկերելով: C-QD-ի բաշխումը զեբրաձկան սաղմերում և թրթուրներում կարելի է հաջողությամբ դիտարկել դրանց ֆլյուորեսցենտային արտանետումից: Zebrafish-ը որպես մոդել օգտագործվել է C-QD-ի կենսաբանական թունավորությունը փորձարկելու համար, և C-QD-ն չի խանգարել զեբրաձկան սաղմերի զարգացմանը: Բոլոր արդյունքները հաստատեցին C-QD-ների բարձր կենսահամատեղելիությունը և ցածր թունավորությունը որպես պատկերային զոնդ: Զեբրաձկան մեջ C-QD-ների կլանման, բաշխման, նյութափոխանակության և արտազատման ուղիները (ADME) բացահայտվում են դրանց բաշխմամբ: Մեր աշխատանքը օգտակար տեղեկատվություն է տրամադրում հետազոտողների համար, ովքեր հետաքրքրված են որպես մոդել օգտագործելու զեբրաձուկը և C-QD-ի կիրառումը: Գործողության հետ կապված զեբրաձուկը հարմար է նանոնյութերի թունավորությունը, անբարենպաստ ազդեցությունները, փոխադրումը և կենսահամատեղելիությունը ուսումնասիրելու համար, ինչպես նաև թմրամիջոցների զննման համար՝ օգտագործելով զեբրաձկան որպես մոդել:
Նանոնյութերը բազմաթիվ զգալի հնարավորություններ են տալիս կենսապատկերման և կլինիկական ախտորոշման համար: Կիսահաղորդչային քվանտային կետերը (QD) մոլեկուլային մեծության նանոբյուրեղներ են, որոնց չափը 10 նմ-ից պակաս է: Իր հզոր քվանտային սահմանափակման էֆեկտի շնորհիվ քվանտային կետերն ունեն մի շարք յուրահատուկ ֆոտոէլեկտրական հատկություններ, ինչպիսիք են չափից և ալիքի երկարությունից կախված լյումինեսցենցիան և ցածր ֆոտոսպիտակեցումը 2, 3, 4: ներառյալ իրական ժամանակում, ճշգրիտ և in-vivo դիտարկումը, բարձր զգայունությամբ, արագ արձագանքմամբ, ցածր գնով և առանց ճառագայթման: Այնուամենայնիվ, ծանր մետաղների օգտագործման պատճառով մետաղների վրա հիմնված քվանտային կետերը (M-QDs) կապված են երկարաժամկետ թունավորության և բնապահպանական խնդիրների հետ5,6: M-QD-ի ստացումը պահանջում է բարդ ընթացակարգեր, և դրանց ագրեգացումը սովորաբար նկատվում է երկարատև պահեստավորումից հետո7:
Ածխածնի քվանտային կետերը (C-QDs) ածխածնային քվազի-գնդաձեւ նյութեր են, որոնց տրամագիծը 10 նմ8-ից պակաս է: C-QD-ն չունի այն թունավոր ազդեցությունները, որոնք դիտվում են ծանր մետաղների դեպքում, քանի որ C-QD-ն պարունակում է մեծ քանակությամբ ածխածին և համեմատաբար քիչ թթվածին, ջրածին և ազոտ9,10: Ածխածինը գոյություն ունի բյուրեղային գրաֆիտի տեսքով, որը հանդիսանում է C-QD-ի միջուկը, մինչդեռ թթվածինը և ջրածինը կազմում են հիդրօքսիլ և կարբոքսիլ խմբեր, որոնք նպաստում են C-QD 8-ի ֆունկցիոնալացմանը և բարելավում են դրա հիդրոֆիլությունը: C-QD-ն նաև ցուցադրում է ալիքի երկարությունից կախված լյումինեսցենտություն և ցածր ֆոտոսպիտակեցում: Բացի այդ, C-QD-ն ունի լավ պահեստավորում և լույսի կայունություն11: Շրջակա միջավայրի պայմաններում 1 տարի պահպանվելուց հետո նկատվել է C-QD-ների լյումինեսցենտային ինտենսիվության լավ կայունություն12: Հետևաբար, հաշվի առնելով C-QD-ի ցածր թունավորությունը և յուրահատուկ ֆոտոֆիզիկական և քիմիական հատկությունները, դրանք դառնում են M-QD-ի իդեալական փոխարինող:
C-QD-ն պատրաստվում է գրաֆիտ 13-ի, մուր 14-ի և կարբոնացված արտադրանքի քիմիական օքսիդացումով՝ ուժեղ թթվով կամ օքսիդանտով, վերևից վար ընթացակարգով [8,15]: Ներքևից վեր բարձրացման մեթոդները բազմազան են, քանի որ տարբեր մոլեկուլային պրեկուրսորներ կարող են հիդրոթերմային մշակվել՝ C-QDs8 ստանալու համար: Թեև ուժեղ թթուներ և օքսիդիչներ չեն պահանջվում, պասիվատորները հնարավորություն են տալիս ստանալ մակերևութային պասիվացում և/կամ հետերոատոմներով դոփված C-QD-ներ և ունեն բարելավված լյումինեսցենտություն8: Օգտագործելով էթիլենդիամինտետրաքացախաթթու (EDTA) որպես պրեկուրսոր 16, կարելի է ստանալ C-QD 78% եկամտաբերություն: Գլյուկոզայի և տարբեր պասիվացնող նյութերի համադրությունը լայնորեն օգտագործվել է C-QD17,18-ի պատրաստման համար՝ ուժեղացված ֆլյուորեսցենտով, բարձր եկամտաբերությամբ, պարզ շահագործման, ցածր գնով և բարձր կենսահամատեղելիությամբ: Այստեղ մենք մանրամասն տեղեկատվություն ենք տրամադրում C-QD-ի պատրաստման մասին՝ օգտագործելով գլյուկոզա և էթիլենդիամին որպես պրեկուրսորներ և պասիվատորներ 19, 20, 21, 22, 23, և դրանց պատկերային կիրառությունները կարևոր մոդելային օրգանիզմներում՝ զեբրա ձուկում:
Զեբրաձկները կարևոր մոդելային օրգանիզմներ են իրենց սաղմնային արագ զարգացման և սերման կարճ ժամանակի պատճառով24: Սաղմի տեղադրման ժամանակը կարելի է կառավարել՝ կարգավորելով լույս-մութ ցիկլը 25: Զեբրաձկների և սաղմերի խնամքը նույնպես շատ պարզ է: Zebrafish-ն օգտագործվել է in vivo պատկերագրման, վարքագծային թեստավորման և բարդ զննման համար26,27: Զեբրաձկան «Մեթոդներ» հատուկ հրատարակությունը թողարկվել է 2013 թվականին երեք ոլորտներում՝ քննարկելով զեբրաձկան կիրառման նոր տեխնոլոգիաները, այդ թվում՝ գենոմիկան և էպիգենոմիկան, վերականգնողական բժշկությունը և մարդու հիվանդությունների մոդելավորումը և զեբրաձկան հետ կապված պատկերավորման տեխնոլոգիաները27: Կարևոր է, որ զեբրաձուկը շատ հոմոլոգ է կաթնասունների նկատմամբ: Մարդու գեների մոտ 70%-ը հոմոլոգ են զեբրաձկներին, 28,29: Հետևաբար, մարդկային հիվանդությունների մոդելավորումը՝ օգտագործելով զեբրաձկան որպես մոդել, դառնում է կարևոր և արագ ռազմավարություն: . Որպես օրինակելի օրգանիզմ օգտագործելու կարևոր նշաձող՝ զեբրաձկան գենոմը զեկուցվել է 201328,29-ին:
Սաղմի զարգացումը կարևոր մոդել է թունավորության, օրգանիզմում համակարգի վնասների և նանոմասնիկների և դեղամիջոցների փոխադրման և կենսահամատեղելիության ուսումնասիրության համար3,30: Զարգացման այս արդյունքների հիման վրա առաջարկվում են մարդու առողջության և շրջակա միջավայրի համար հնարավոր ռիսկերը: Համեմատած ողնաշարավորների այլ մոդելային համակարգերի հետ (ինչպիսիք են մկները և առնետները), զեբրաձկան սաղմերը եզակի են այս հետազոտություններում31,32: Զեբրաձկան սաղմնային զարգացումն ավարտվում է արագ 120 ժամվա ընթացքում, և նրա զարգացման փուլն ունի լավ բնութագրեր։ Զեբրաձկան սաղմերի հատուկ արտաքին զարգացումը օգնում է ուղղակիորեն տեսողականորեն բացահայտել սաղմնային պաթոլոգիական մահվան և դիսպլազիայի ֆենոտիպերը: Բացի այդ, զեբրաձկան սաղմերը թափանցիկ են, և հեշտ է անտեսել նանոմասնիկների փոխադրումն ու ազդեցությունը և իրական ժամանակում թմրամիջոցների զննում31,32: Սաղմի զարգացման վրա հիմնված արդյունքներն ապացուցեցին դոզայից կախված կենսահամատեղելիությունը, սաղմի սկզբնական քայլերը, նանոնյութերի պոտենցիալ կիրառությունները և անբարենպաստ ազդեցությունները և դեղերի զննում [3,33,34]: Այս տեսակի հետազոտությունների համար շատ կարևոր է սաղմերի մեջ օտար տեսակների ներմուծումը:
Zebrafish-ը լայնորեն օգտագործվել է կենսաբանական և կենսաքիմիական հետազոտություններում, ինչպիսիք են լյումինեսցենտային սպիտակուցի արտահայտումը 35, սրտի արյան հոսքի տեսանելիությունը 36, գենային նոկաուտը և սրտի ֆունկցիոնալ պատկերացումը 37, ոսկրային կալցիֆիկացման արատներով մուտանտների ուսումնասիրությունը 38 և նանոմասնիկների օքսիդատիվ թունավորությունը: . Զեբրաձկան սկզբնական սեռական բջիջները (PGC) մշտադիտարկվում են՝ ստուգելու դրանց մորֆոլոգիան վաղ զարգացման ընթացքում40: Զեբրաձկան մեջ սաղմնածինը լայնորեն ուսումնասիրվել է in vivo պատկերազարդման միջոցով41: Այստեղ մենք նկարագրում ենք զեբրաձկան կուլտուրան և վիրահատությունները, որոնք ներառում են զեբրաձկան ֆլուորեսցենտային պատկերացում՝ օգտագործելով C-QD-ները որպես զոնդեր: Այն մանրամասնորեն բացատրում է, թե ինչպես կարելի է C-QD ներմուծել զեբրաձկան սաղմերի և թրթուրների մեջ միկրոներարկման և ընկղման միջոցով:
Պարզապես ընկղմելով սաղմը C-QD-ի լուծույթի մեջ՝ C-QD-ները կարող են ներթափանցել դեղնուցի թաղանթ և բողբոջել սաղմի մեջ: C-QD-ների ֆլյուորեսցենցիան դիտարկել է դրանց բաշխումը զեբրաձկան սաղմերում և թրթուրներում և ստուգել C-QD-ների ներուժը որպես զոնդ: Միկրոներարկման պրոցեդուրաներն օգտագործվել են ԴՆԹ-ի ներարկումից հետո տրանսգենիկ զեբրաձուկ արտադրելու համար, գենային նոկաունի իջեցում հակասենսային մորֆոլինոյի ներարկումից հետո, միկրոօրգանիզմների ներարկումից հետո վարակիչ հիվանդությունների ուսումնասիրման և քաղցկեղի բջիջների ներարկումից հետո ուռուցքի առաջընթացի ուսումնասիրման համար42: Նկարագրում է C-QD-ի միկրոներարկման ընթացակարգը զեբրաձկան սաղմերում լյումինեսցենտ կենսաբանական պատկերման համար: Որոշակի ճշգրտումից հետո այլ նանոնյութեր կամ դեղամիջոցներ կարող են օգտագործվել՝ միկրոներարկման ընթացակարգը զեբրաձկան սաղմի մոդելին հարմարեցնելու համար: Զեբրաձկան աճեցումն ու մշակումը պարզ և հարմար է, մինչդեռ C-QD-ն ունի կենսահամատեղելիություն և ցածր թունավորություն: Այս հոդվածը օգտագործում է C-QD-ները որպես զոնդ՝ զեբրաձկան ֆլյուորեսցենտային կենսապատկերում կատարելու համար, որը օրինակ է, որը կարող է կիրառվել կենսաբանության հիմնական հետազոտության և դեղերի զննման համար:
Նրա առաջին հայտնագործությունից ի վեր՝ 200443, լայնածավալ հետազոտություններ են իրականացվել C-QD-ի պատրաստման և ֆոտոէլեկտրական հատկությունների վերաբերյալ (ինչպիսիք են ֆլուորեսցենտությունը, էլեկտրաքիմիլյումինեսցենտը և կատալիզը)44: Նրանց գրգռումից կախված արտանետումների բնութագրերը C-QD-ներին թույլ են տալիս կատարել բազմագույն բջիջների պատկերավորում44: Sun's Group45-ը իրականացրել է երկու ֆոտոնային պատկերավորում C-QD-ով որպես զոնդ: Հիդրոթերմային ընթացակարգի միջոցով C-QD-ի պատրաստումը գլյուկոզայով որպես պրեկուրսոր համեմատաբար պարզ է: Բացի այդ, էթիլենդիամինը որպես պասիվացնող նյութ կարող է զգալիորեն մեծացնել ֆլուորեսցենտային արտանետումը46: Նկար 1-ը ցույց է տալիս փոխանցման էլեկտրոնային մանրադիտակի (TEM) պատկերը և C-QD-ի չափերի բաշխումը, որը պատրաստված է գլյուկոզայի և էթիլենդիամինի օգտագործմամբ որպես պրեկուրսորներ: C-QD-ի չափը հիմնականում բաշխված է 1-3 նմ միջակայքում՝ 1,89 նմ միջին տրամագծով (Նկար 1B), որը հաստատում է C-QD-ի քվանտային սահմանափակման ազդեցությունը նանոմաշտաբի վրա։ C-QD-ի կլանման և ֆլուորեսցենտային սպեկտրները գրգռման ալիքի տարբեր երկարություններում ներկայացված են Նկար 1C-ում: Գծապատկեր 1C-ի ներդիրում C-QD-ի արտանետումների նորմալացված սպեկտրը հստակ ցույց է տալիս գրգռման հետ կապված արտանետումը, որը հնարավորություն է տալիս օգտագործելու C-QD որպես զոնդ բազմագույն պատկերման համար:
Փոխանցման էլեկտրոնային մանրադիտակի (TEM) պատկերը (A) և C-QD-ի չափի բաշխումը (B): (C) C-QD-ի կլանման և ֆլուորեսցենտային սպեկտրները տարբեր գրգռման ալիքի երկարություններով: Ներդիր. նորմալացված լյումինեսցենտային սպեկտր: Սանդղակի սանդղակ, 20 նմ:
Ռենտգենյան ֆոտոէլեկտրոնային սպեկտրոսկոպիայի (XPS) վերլուծությունը ցույց է տվել սինթեզված C-QD-ի բաղադրությունը: Ինչպես ցույց է տրված Նկար 2A-ում, C, N և O-ն հայտնաբերվել են XPS սպեկտրի C-QD-ում: C1s գագաթնակետը բաժանված է երեք բաղադրիչի` համապատասխանաբար 284.6, 285.8 և 287.4 eV, որոնք ներկայացնում են sp2C-sp2C, N-sp2C և CO/C=O կապերը 21, 47, 48 (Նկար 2B): N1-ների բարձր լուծաչափի սպեկտրը (Նկար 2C) ցույց է տալիս պիրիդինի (399,2 էՎ) և պիրոլի (401,2 էՎ) N ատոմների առկայությունը [21,48], ինչը ցույց է տալիս, որ C-QD-ն հաջողությամբ լիցքավորվել է ազոտի ատոմներով: Նկար 2C-ը ցույց է տալիս, որ O1s գագաթը կարող է քայքայվել երկու բաղադրիչի, որոնք կենտրոնացած են 530.7 և 531.3 eV լարման վրա, որոնք ներկայացնում են C=O և C-OH/COC 49,50 խմբերի առկայությունը: XPS-ի արդյունքները ցույց են տվել, որ սինթեզված C-QD-ի մակերեսը ֆունկցիոնալացվել է բազմաթիվ թթվածնի և ազոտի խմբերով գլյուկոզայի և էթիլենդիամինի միջև ռեակցիայի միջոցով:
Զեբրաձուկը լայնորեն օգտագործվել է կենսաբանական և կենսաքիմիական հետազոտություններում40: Մենք որպես մոդել ընտրեցինք զեբրաձուկը, քանի որ այն լայնորեն օգտագործվել է բժշկական և քիմիական հետազոտություններում: Զեբրաձկան սաղմը նաև կարևոր մոդել է թունավորությունը, համակարգի վնասը in vivo, ինչպես նաև նանոմասնիկների և դեղամիջոցների տեղափոխումն ու կենսահամատեղելիությունը ուսումնասիրելու համար3,30: Ինչպես ցույց է տրված Նկար 3-ում, ստուգվել է բազմագույն in vivo ֆլուորեսցենտային պատկերումը, օգտագործելով C-QDs որպես զոնդ: Նկար 3-ը ցույց է տալիս C-QD-ով ներծծված սաղմերի վառ դաշտային և բազմագույն ֆլուորեսցենտային պատկերները: Դեղնուցի և սաղմի ներքին որակի միջև պայծառության տարբերությունը լյումինեսցենտային պատկերում ցույց է տալիս, որ C-QD-ն տարբեր կապեր ունի այս հյուսվածքների նկատմամբ (Նկար 3B–D): Հետևաբար, C-QD-ն մտնում է սաղմի մեջ՝ ուղղակի ընկղմելով այն քորիոնի և մանրէի միջով և հիմնականում նստում է դեղնուցի պարկի մեջ՝ փոքր չափի պատճառով: Երբ C-QD-ների կոնցենտրացիան մեծանում է, սաղմերի ֆլյուորեսցենտային պատկերները դառնում են ավելի պայծառ (Նկար 3B–D), մինչդեռ նրանց պայծառ դաշտի պատկերները չեն տարբերվում միմյանցից (Նկար 3Ա): Սաղմի կապույտ ֆլյուորեսցենտային պատկերը կարելի է դիտել ուլտրամանուշակագույն ճառագայթմամբ (Նկար 3B), մինչդեռ կանաչ և կարմիր պատկերները կարող են դիտվել կապույտ և կանաչ լուսավորությամբ (Նկար 3C, D): C-QD-ների ֆլյուորեսցենցիան կարող է դիտարկել դրանց բաշխումը զեբրաձկան սաղմերում և ստուգել C-QD-ների գործնականությունը որպես պատկերային զոնդ:
Brightfield (A) և բազմագույն ֆլուորեսցենտային [(B) կապույտ, (C) կանաչ և (D) կարմիր) պատկերներ զեբրաձկան սաղմերը՝ 3 ժամ տարբեր կոնցենտրացիաների C-QD լուծույթներում թրջելուց հետո:
Ուժեղ լույսի ներքո ձեռք բերված պատկերները ցույց են տալիս դեղնուցի պարկը (ys) և սաղմի ներքին որակը (ime): Օգտագործվում է 10x ակնոց և 4x օբյեկտիվ ոսպնյակ: Կշեռքի բար, 1,0 մմ:
C-QD-ում ընկղմվելուց հետո զեբրաձկան սաղմերի ֆլուորեսցենտային պատկերումը թույլ է տալիս պատկերացնել սաղմի զարգացումը` միայնակ բջիջներից մինչև թրթուրներ (Նկար 4): Սաղմերի ֆլյուորեսցենտային պատկերներից, որոնք ընկղմված են 2,5 մգ մլ-1 C-QD լուծույթի մեջ տարբեր ժամանակահատվածներում (ներքևի շարքում նկար 4D–F-ում), C-QD-ները հիմնականում նստած են դեղնուցի պարկի մեջ 24 hpf ((Նկար 4D), Այն վերաբաշխվում է թրթուրի միջով 48 hpf (դեղին սլաքը Նկար 4E, F-ում Սաղմի զարգացման ընթացքում C-QD-ն ունի տարբեր կապակցություններ, երբ աճում է ինկուբացիոն ժամանակը): դառնում է ավելի ու ավելի մուգ 60 hpf-ի դեպքում, C-QD-ի ֆլյուորեսցենտային արտանետումը սաղմի մեջ գրեթե անհետանում է, որ մարսողական համակարգը հեռացնում է սաղմից որոշ C-QD, ինչպես ցույց է տրված վառ աղիքը 48 hpf-ով: Համեմատելով C-QDs լուծույթում (Նկար 4-ի վերին շարքում) 3 ժամվա ընթացքում և հսկողության (Նկար S1-ի վերին շարքը) մշակված սաղմերի պայծառ դաշտային պատկերները տարբեր ժամանակահատվածներում, մենք պարզեցինք, որ C-QD-ները չեն խանգարել: Սաղմի զարգացումը, որն ապացուցում է C-QD-ի ցածր թունավորությունը և բարձր կենսահամատեղելիությունը, իր կայուն ֆլյուորեսցենտային արտանետման և կենսահամատեղելիության շնորհիվ, C-QD-ն օգտագործվում է զեբրաձկան սաղմի զարգացման հետ կապված կենսաբանական երևույթների բացահայտման համար: Առաջընթաց ժամանակի և տարածության մեջ:
Brightfield (վերին) և ֆլուորեսցենտային (ներքևի) պատկերներ զեբրաձկան սաղմերը 2,5 մգ մլ-1 C-QDs լուծույթը 3 ժամ ընկղմվելուց հետո ժամանակային կետում.
(A) 3, (B) 6, (C) 12, (D) 24, (E) 48, (F) 60 hpf. Օգտագործվում է 10x ակնոց և 4x օբյեկտիվ ոսպնյակ: Կշեռքի բար, 1,0 մմ:
C-QD-ի միկրոներարկումն օգտագործվում է զեբրաձկան սաղմերի մեջ օտար տեսակների ներմուծման ընթացակարգը լուսաբանելու համար: C-QD միկրոներարկված սաղմերի պայծառ դաշտը և ֆլուորեսցենտային պատկերները ներկայացված են Նկար S2-ում: Քանի որ C-QD-ի կոնցենտրացիան մեծանում է, սաղմերի լյումինեսցենտային պատկերները դառնում են ավելի պայծառ (Նկար S2-ի ներքևի շարք), մինչդեռ նրանց պայծառ դաշտի պատկերները էականորեն չեն տարբերվում (Նկար S2-ի վերին շարքում): Սաղմի պայծառությունը ցույց տվեց, որ C-QD-ները հաջողությամբ մտցվել են սաղմի մեջ միկրոներարկման միջոցով, և սաղմը դեռ կենդանի էր: Հետևաբար, միկրոներարկումն այս նյութերն ուղղակիորեն սաղմերի մեջ ներմուծելու ռազմավարություն է:
Միկրոներարկման պրոցեդուրաներն օգտագործվել են ԴՆԹ-ի ներարկումից հետո տրանսգենային զեբրաձուկ ստեղծելու, անտիսենս մորֆոլինոյի ներարկումից հետո գենային նոկաունի, միկրոօրգանիզմների ներարկումից հետո վարակիչ հիվանդությունների ուսումնասիրության և քաղցկեղի բջիջների ներարկումից հետո ուռուցքի առաջընթացի ուսումնասիրման համար42: Զեբրաձկան սաղմերում C-QD-ի միկրոներարկման ընթացակարգը կարող է օգտագործվել նաև վերոնշյալ հետազոտության մեջ, օրինակ՝ այլ նանոնյութերում կամ զեբրաձկան սաղմերի վրա հիմնված դեղամիջոցներում: Հետաքրքիր է, որ C-QD-ի բաշխումը զեբրաձկան սաղմերում տարբեր է, և կան ներածման տարբեր մեթոդներ՝ ընկղմում կամ միկրոներարկում: Այս երևույթը կարող է վճռորոշ լինել C-QD-ի հետագա բժշկական և քիմիական կիրառման համար:
Զեբրա ձկան թրթուրները օգտագործվել են որպես մոդել՝ C-QD-ի պատկերավորման կիրառությունը և հյուսվածքների բաշխումը in vivo վավերացնելու համար: Նկար 5-ում ներկայացված են զեբրաձկան թրթուրների ամբողջ մարմնի և ուժեղացված մասերի պատկերները 10 ժամվա ընթացքում տարբեր կոնցենտրացիաների C-QD լուծույթներում ներծծվելուց հետո: Քանի որ C-QD-ի կոնցենտրացիան մեծանում է կոնցենտրացիայից կախված մոդելում, C-QD-ներին ենթարկված զեբրաձկան թրթուրները դառնում են ավելի պայծառ, ինչը ցույց է տալիս, որ C-QD-ները հաջողությամբ ներդրվել են թրթուրների մեջ: Այն բանից հետո, երբ C-QD-ն թրթուր է մտնում կուլ տալու և մաշկի ներծծման միջոցով 51, 52, նրանք ընտրողաբար հավաքվում են գլխում, դեղնուցի պարկի և պոչում՝ ցույց տալով C-QD-ի հյուսվածքից կախված կապը (Նկար 5): Մեջքային աորտայի պայծառությունը ցույց է տալիս, որ C-QD-ն մտել է շրջանառության համակարգ (Նկար 5D), ինչը կարևոր է զեբրաձկան մեջ C-QD-ի տեղափոխման համար: Աչքը զեբրաձկան գլխի ամենապայծառ մասն է, և նրա պայծառությունն աճում է C-QD-ների կոնցենտրացիայի մեծացմամբ, և ոսպնյակը հեշտությամբ տարբերվում է ակնագնդից (Նկար 5B): Սա ցույց է տալիս, որ C-QD-ն կարող է անցնել արյան աչքի պատնեշը և մտնել աչք: Դեղնապարկի մեջ C-QD-ն հիմնականում կուտակվում է աղիքներում, ինչը ցույց է տալիս, որ C-QD-ն մտնում է մարսողական համակարգ և կարող է հեռացվել մարմնից (Նկար 5C): Որոշ C-QD հեռացվել է զեբրաձկան թրթուրներից նյութափոխանակության միջոցով, ինչը հաստատվել է պայծառ աղիքներով (Նկար 5Ա): C-QD-ները նախընտրելիորեն կուտակվում են զեբրաձկան շուրջը (Նկար 5B, D), ինչը ցույց է տալիս, որ մաշկի կլանումը կարևոր միջոց է C-QD-ների համար զեբրաձուկ մտնելու համար: Հետևաբար, զեբրաձկան ուրվագիծը պատկերված է C-QD-ի արտանետվող ֆլուորեսցենտով:
Տարբեր C-QD լուծույթներում 10 ժամ ընկղմվելուց հետո զեբրաձկան թրթուրների (A) ամբողջ մարմինը, (B) գլուխը, (C) դեղնուցի պարկը և (D) պոչի կոնցենտրացիան լուսավոր դաշտի (վերին) պատկերներ և լյումինեսցենտային (ներքևի) պատկերներ։ . Խոշորացված պատկերը ցույց է տալիս (B) աչքը և ոսպնյակը, (C) դեղնուցի պարկը և աղիքները, և (D) պոչի արյունատար անոթները՝ լյումինեսցենտային պատկերներով: Օգտագործեք 10 անգամ ակնոցներ (A, B, C և D): (A) Օգտագործեք 4 անգամ օբյեկտիվ ոսպնյակներ, (B, C և D) օգտագործեք 10 անգամ օբյեկտիվ ոսպնյակներ: Սանդղակի սանդղակը (A) 1,0 մմ է, (B), (C) և (D) 500 մկմ:
Հետևաբար, զեբրաձկան մեջ C-QD-ների կլանման, բաշխման, նյութափոխանակության և արտազատման (ADME) ուղիները բացահայտվում են դրանց բաշխման միջոցով: C-QD-ն ներթափանցում է զեբրաձկան մարմին 52 կուլ տալու և մաշկի կլանման միջոցով և մասամբ արտազատվում աղիքների միջոցով: Որոշ C-QD մտնում է սրտանոթային համակարգ և փոխանցվում ամբողջ մարմնով, ինչը հաստատվում է արյան անոթների և պոչի հյուսվածքների պայծառությամբ: Հետևաբար, C-QD-ն կենսահամատեղելի զոնդ է, որը չունի ակնհայտ մարման ազդեցություն և հարմար է in vivo պատկերավորման համար: Զեբրաձուկն ունի կաթնասունների հետ հոմոոլոգիայի բարձր աստիճան28,29, ուստի զեբրաձկից ստացված արդյունքները կարող են օգտագործվել այլ բարձրակարգ կենդանիների կենսաբանական ազդեցությունները մոդելավորելու համար:
C-QD ֆլուորեսցենտը կարող է օգտագործվել նաև զեբրաձկան մորֆոլոգիան լուսաբանելու համար լազերային սկանավորման համաֆոկալ պատկերման միջոցով: Ինչպես ցույց է տրված Նկար 6-ում, C-QD-ն հավաքվել է թրթուրի դեղնուցի պարկի և ակնագնդի վրա: Տարբեր սկանավորման հարթություններում համակցված պատկերները հստակ ցույց են տալիս դեղնուցի պարկի կիստա նման կառուցվածքը: Պարզվել է նաև, որ C-QD-ն կուտակվում է ակնագնդի վրա և ներթափանցում ոսպնյակի մեջ, ինչը նշանակում է, որ C-QD-ն կարող է ներթափանցել արյան-աչքի արգելքը և մտնել աչք։ Կոնֆոկալ պատկերի արդյունքները լավ համընկնում են Նկար 5-ի արդյունքների հետ: Զեբրաձկան թրթուրների միջին ուղեղի մթությունը ցույց է տալիս, որ C-QD-ն չի կարող անցնել արյունաուղեղային պատնեշը (BBB) ​​և մտնել ուղեղ: Բոլոր արդյունքները հաստատում են, որ C-QD-ն ունի in vivo պատկերավորման ներուժ, քանի որ դրանք հեշտությամբ տեղափոխվում են սրտանոթային և մարսողական համակարգերով: Քանի որ զեբրաձկան աչքի զարգացումը և մորֆոլոգիան նման են այլ ողնաշարավորների աչքին, C-QD-ի ընտրովի կուտակում կարող է տեղի ունենալ այլ ողնաշարավորների աչքի տարածքում, ինչը ցույց է տալիս C-QD-ի պոտենցիալ պատկերավորման կիրառումը: Բացի այդ, զեբրաձկան գլխի ներսում մուգ տեսքը ցույց է տալիս, որ C-QD-ն չի կարող անցնել BBB-ը և մտնել ուղեղ: Սա ցույց է տալիս, որ C-QD-ն կարող է օգտագործվել աչքերի հետ կապված պատկերավորման համար, և ուղեղի վնասման հավանականությունը շատ ցածր է:
Զեբրաձկան համաֆոկալ պատկերներ (72 hpf թրթուրներ ընկղմված 2,50 մգ մլ-1 C-QD 10 ժամվա ընթացքում) տարբեր սկանավորման հարթություններում:
Հստակ տեսանելի են ոսպնյակը, աչքերը, դեղնուցի պարկը և միջին ուղեղը։ Օգտագործվում է 10x ակնոց և 10x օբյեկտիվ ոսպնյակ: Կշեռքի բար, 250 մկմ:
Զեբրաձկան սաղմերը և թրթուրները օգտագործվել են որպես մոդելներ՝ ստուգելու համար ընկղմվելուց/միկրոներարկումից հետո սինթեզված C-QD-ի in vivo բիոտոքսիկությունը և կենսահամատեղելիությունը: Ինչպես ցույց է տրված Նկար S3A-ում, 1,5 մգ մլ-1 C-QDs լուծույթի միկրոներարկումից հետո 0~3 hpf-ի սահմաններում, զեբրաձկան սաղմերի գոյատևման մակարդակը 80%-ից բարձր է եղել 24 hpf-ում, իսկ 2,5 մգ-ի դեպքում գոյատևման մակարդակը նվազել է մինչև մոտ: 55% մլ-1 C-QDs լուծույթ: Ցածր կոնցենտրացիայի C-QDs լուծույթի մեջ ընկղմված սաղմերի գոյատևման գործակիցը (0,5, 1,0, 1,5 մգ մլ-1) 0~3 hpf-ում 80%-ից բարձր է 24 hpf-ի դեպքում, մինչդեռ սաղմերը ընկղմված են 2,5 մգ մլ-ում – գոյատևման մակարդակը: կրճատվել է մոտ 60%-ի 1 C-QD լուծույթով (Նկար S3B): Նկար S4-ը ցույց է տալիս զեբրաձկան թրթուրների գոյատևման մակարդակը 84 hpf-ում C-QDs լուծույթում 10 ժամ թրջվելուց հետո: Հսկիչ խմբի նման, ցածր կոնցենտրացիայի C-QDs լուծույթում ներծծված թրթուրների գոյատևման մակարդակը (0,156, 0,313, 0,625 մգ մլ-1) ավելի բարձր էր, քան 95%: 10 ժամ 1,25 և 2,5 մգ մլ-1 C-QDs լուծույթներում ներծծվելուց հետո զեբրաձկան թրթուրների գոյատևման մակարդակը համապատասխանաբար 85%-ից և 55%-ից բարձր էր: Օգտագործելով զեբրաձկան որպես մոդել, ուսումնասիրվել է maghemite@SiO2 չախչախանման միկրոսֆերաների թունավորությունը, և պարզվել է, որ maghemite@SiO2-ի 200 μgmL-1-ը լուրջ դեֆորմացիաներ է առաջացրել զեբրաձկների մոտ53: Հետևաբար, C-QD-ների թունավորությունն ավելի ցածր է, քան maghemite@SiO2 միկրոսֆերաները: Համեմատած մետաղի վրա հիմնված քվանտային կետերի և 53,54,55,56 այլ նանոմասնիկների հետ, C-QD-ն ավելի բարձր հանդուրժողականություն ունի զեբրաձկան սաղմերի և թրթուրների նկատմամբ:
Բացի այդ, ինչպես ցույց է տրված Նկար 1.5-ում, զեբրաձկան թրթուրները սովորաբար աճում են 1,5 մգ մլ-1 C-QDs լուծույթի մեջ ընկղմվելուց հետո: Փորձարարական խմբի դեֆորմացիան շատ փոքր էր, գրեթե նույնն էր, ինչ վերահսկիչ խմբին: Արդյունքը նաև հաստատեց, որ մեր C-QD-ն ունի լավ կենսահամատեղելիություն: Քանի որ ինկուբացիոն ժամանակը մեծանում էր, C-QD-ների ֆլյուորեսցենտությունը զեբրաձկան թրթուրներում դառնում էր ավելի ու ավելի թույլ (Նկար S5B): Գլխի և պոչի C-QD-ն ավելի արագ է հեռացվում, քան դեղնուցը: Աղիքները (դեղին սլաքը Նկար S5B-ում) միշտ թրթուրի ամենապայծառ մասն է, ինչը հետագայում հաստատում է այն եզրակացությունը, որ C-QD-ն հեռացվում է թրթուրից նյութափոխանակության միջոցով: Հետևաբար, C-QD-ն հեռացվում է թրթուրներից և չի ազդում թրթուրների զարգացման վրա:
Եզրակացությունն այն է, որ C-QD-ների պատրաստման, զեբրաձկան բուծման, սաղմերի հավաքման և C-QD-ների սաղմերի և թրթուրների մեջ ընկղմման և միկրոներարկման միջոցով ներմուծելիս, զեկուցվում է զեբրաձկան ֆլյուորեսցենտային պատկերագրում՝ օգտագործելով C-QDs որպես զոնդ: C-QD-ների ֆլյուորեսցենցիան կարող է դիտարկել դրանց բաշխումը զեբրաձկան սաղմերում և թրթուրներում և ստուգել C-QD-ների օգտագործումը որպես պատկերային զոնդ: Zebrafish-ը նաև օգտագործվել է որպես մոդել՝ ստուգելու C-QD-ների բնութագրերը, ինչպիսիք են բազմագույնը, ցածր թունավորությունը և բարձր կենսահամատեղելիությունը: C-QD-ների բազմագույն ֆլյուորեսցենցիան մնում է զեբրաձկան սաղմում և կարող է օգտագործվել in vivo բազմագույն պատկերավորման համար: Այն հստակ ցույց է տալիս զեբրաձկան թունավորությունը և դրա ազդեցությունը սաղմնային զարգացման և C-QD-ների կենսաբաշխման վրա: C-QD-ները կարող են մտնել զեբրաձկան սաղմերը և թրթուրները՝ ընկղմվելով և կենտրոնանալով տարբեր մասերում, ինչը ցույց է տալիս նրանց հյուսվածքային կապը զեբրաձկան հետ: Ե՛վ միկրոներարկումը, և՛ ընկղմումը օգտագործվում են C-QD-ներ զեբրաձկան սաղմերի մեջ ներմուծելու համար, ինչը հաստատում է, որ այս գործողությունը ընդհանուր ռազմավարություն է զեբրաձկան մեջ տարբեր տեսակներ ներմուծելու համար՝ այլ դեղամիջոցների և նանոնյութերի ուսումնասիրության համար: Զեբրաձկան ֆլյուորեսցենտային կենսապատկերումը C-QD-ներով որպես զոնդ տալիս է օրինակ, որը կարող է օգտագործվել կենսաբանության հիմնական հետազոտության, թունավորության փորձարկման և դեղորայքի զննումում՝ օգտագործելով zebrafish-ը որպես մոդել:
Գլյուկոզա գնել են Չինաստանի Շանհայ քաղաքում գտնվող Amresco-ից: Ֆենոլի կարմիր լուծույթը, պարաֆինային յուղը, 1-ֆենիլ-2-թիուրիան և 3-ամինոբենզոատ մեթանասուլֆոնատը ձեռք են բերվել Չինաստանի Շանհայ քաղաքում գտնվող Sigma-Aldrich-ից: Էթիլենդիամինը գնվել է Tianjin Chemical Reagent Wholesale ընկերությունից Չինաստանի Տյանցզին քաղաքում: Բարձր մաքրության ազոտը ստացվել է Չինաստանի Տյանցզին քաղաքի Լյուֆանգ բարձր տեխնոլոգիական գազի գործարանից: Բոլոր լուծույթները պատրաստվել են Չինաստանի Չունցին քաղաքի Aquapro ուլտրամաքուր ջրային համակարգից ուլտրամաքուր ջրի (18,25 MΩcm) օգտագործմամբ:
Հաղորդման էլեկտրոնային մանրադիտակի (TEM) պատկերը կատարվել է ԱՄՆ-ի FEI ընկերության Tecnai G2 F20-ի միջոցով և այն գործել է 200 կՎ արագացնող լարման պայմաններում: Ռենտգենյան ֆոտոէլեկտրոնային սպեկտրոսկոպիայի (XPS) վերլուծությունը կատարվում է Kratos Axis Ultra DLD սպեկտրոմետրով, որը հագեցած է մոնոխրոմատիկ AlKα ռենտգեն աղբյուրով (hν1486.6 eV), հիբրիդային (մագնիսական/էլեկտրոստատիկ) օպտիկայով, բազմաալիքային թիթեղով և հետաձգման գծի դետեկտորով։ . Ուլտրամանուշակագույն ճառագայթման տեսանելի կլանման սպեկտրը գրանցվել է Shimadzu Corporation-ի UV-2450 սպեկտրոֆոտոմետրով: C-QD-ի ֆլյուորեսցենտային սպեկտրը կատարվել է FL-4500 ֆլուորեսցենտային սպեկտրոմետրի միջոցով Հիտաչիից, Ճապոնիա: Leica 200 M 2000 մանրադիտակի տակ ճապոնական Olympus-ի DP71 թվային ֆոտոխցիկը տեղադրվել է BX51 ֆլուորեսցենտային մանրադիտակի և Olympus DP71-ի վրա՝ պայծառ դաշտի և լյումինեսցենտային պատկերներ ստանալու համար: Փորձարկման մեջ օգտագործված միկրոզարկերակային ճնշման ներարկիչը ամերիկյան ASI, MPPI-3 է:
Գրգռման հետ կապված արտանետումը նկատվել է, երբ հավաքվել է ֆլուորեսցենտային պատկերը, որը հաստատել է C-QD-ի բազմախրոմատ բնույթը: Զեբրաձկների և նրանց սաղմերի լյումինեսցենտային պատկերները հավաքելիս զգայունությունը (ISO 400) կարող է պահպանվել սարքավորումների միջամտությունը նվազեցնելու համար: Նախքան ֆլուորեսցենտային պատկերներ ձեռք բերելը, նախ ձեռք բերեք պայծառ դաշտի պատկերներ՝ զեբրաձկան սաղմերի կամ թրթուրների մորֆոլոգիան գրանցելու համար: Վերահսկիչ նմուշն օգտագործվում է ազդեցության ժամանակը օպտիմալացնելու և գրեթե անտեսանելի ֆլուորեսցենտային պատկերներ ստանալու համար: Այս գործընթացը կրկնվում է ամեն անգամ, երբ պատկերը ձեռք է բերվում տարբեր ժամանակներում:
Ավելացրեք 40 մգ գլյուկոզա, 10 մլ գերմաքուր ջուր և 100 մկլ էթիլենդիամին տեֆլոնով պատված ավտոկլավի անոթի ներքին երեսպատմանը (30 մլ) (Նկար S6A), այնուհետև դրեք ներքին երեսպատումը ուլտրաձայնային մաքրիչի մեջ և կատարեք ուլտրաձայնային բուժում և կանգնեք: 10 րոպե անգույն և թափանցիկ լուծույթ ստանալու համար։ Ծածկույթը կնքվում է տարայի մեջ և տաքացվում է 200°C ջերմաստիճանում 4 ժամ, այնուհետև բնականաբար սառչում է մինչև շրջակա միջավայրի ջերմաստիճանը (20°C-30°C) (Նկար S6B): Ստացված շագանակագույն լուծույթը 10 րոպե ցենտրիֆուգել են 12000 ռ/րոպե արագությամբ։ Այնուհետև վերին նյութը հավաքվել և լիոֆիլացվել է 28 ժամով՝ շագանակագույն C-QD մածուկ ստանալու համար, որը կարող է կրկին լուծվել հետագա օգտագործման համար: C-QD-ի պատրաստման քայլ առ քայլ գործընթացը կարելի է գտնել SI-ում:
Զեբրաձուկը աճեցվում է շրջանառվող ջրի մեջ 10 լ ակվարիումում (օգտագործեք NaCl և NaHCO3 և pH 7.0-7.2՝ մոտ 450-500 μscm-1 աղիությունը վերահսկելու համար, ամեն օր ավելացրեք 10% թարմ դեիոնացված ջուր) 28.5°C ջերմաստիճանում. 10/14-ժամյա մութ/պայծառ ցիկլ (լուսավորվում է 7:00-21:00): Օրական 10 լ ակվարիումում կերակրեք նրանց 3 մլ թարմ բացված կենդանի աղաջրածով ծովախեցգետինով ամեն օր առավոտյան ժամը 8:00-ին, 12:00-ին և 17:00-ին (3,5 գ ծովախեցգետնի սաղմերը 1 գ ջրի մեջ): Դուրս): (Ծանոթագրություն. Zebrafish-ը և նրանց սաղմերը զգայուն են pH-ի և ջերմաստիճանի նկատմամբ, ուստի խնդրում ենք համոզվեք, որ միջավայրի pH-ը լինի 7,0–7,2, իսկ մշակումը 28,5°C-ում; 10 լ ակվարիումում չափահաս զեբրաձկների թիվը պետք է լինի 10-ից պակաս։ .) Կենդանիներ օգտագործող բոլոր փորձարարական արձանագրությունները հաստատվել են Նանկայի համալսարանի Կենդանիների խնամքի ինստիտուտի կողմից: Մեթոդն իրականացվում է հաստատված ուղեցույցների համաձայն:
Ընտրեք մեկ չափահաս էգ զեբրաձուկ և երկու չափահաս արու զեբրաձուկ և դրանք տեղադրեք 1,5 լիտրանոց բազմացման վանդակի տարբեր կողմերում, ժամը 17:30-ին՝ բաժանարար գծով (Նկար S7A և B): Հեռացրեք բաժանարար գիծը բազմացման վանդակից հաջորդ առավոտյան ժամը 8:30-ին (Նկար S7C): Կես ժամ հետո սաղմերը հավաքվել են բազմացման վանդակից ֆիլտրի միջոցով և սնվել E3 միջավայրով՝ միաժամանակ հեռացնելով չբեղմնավորված սաղմերը և բեկորները (Նկար S7D): (Ծանոթագրություն. Ձվադրման ժամանակ մի խանգարեք զեբրաձկներին, որպեսզի չազդեք նրանց ձվադրման վրա:) Զեբրաձկները կարող են վերակազմավորվել ավելի մեծ ակվարիումում՝ ավելի շատ սաղմեր արտադրելու համար: Զեբրաձկան աճեցման և սաղմի հավաքման քայլ առ քայլ գործընթացը կարելի է գտնել SI-ում:
Միկրոներարկման ասեղը պատրաստելու համար օգտագործեք միկրոբեռնիչ խողովակ՝ ասեղի մեջ 2 մկլ 25% ֆենոլ կարմիր լուծույթ քաշելու համար: Ասեղը մտցրեք միկրո ներարկիչի մեջ և փակեք այն: Միացրեք օդի աղբյուրը և միկրո ներարկիչը: Քայլեք ոտնաթաթի վրա և վերահսկեք ֆենոլ կարմիր լուծույթի կաթիլների տրամագիծը, միաժամանակ մանրադիտակի տակ կտրելով ասեղը և անհրաժեշտության դեպքում կարգավորելով ներարկման ճնշումը: Պարաֆին յուղի մեջ ֆենոլ կարմիր լուծույթի կաթիլային տրամագիծը օգտագործվում է մեկ ներարկման ծավալը հաշվարկելու համար: 0,12 մմ տրամագծով ֆենոլի կարմիր լուծույթի հատիկները կազմում են 1 նլ (մեկ միկրոներարկման համար պահանջվող ծավալը) ֆենոլ կարմիր լուծույթ (Նկար S8A): (Նշում. Իդեալական ներարկման ծավալը սաղմի ծավալի մոտավորապես 10%-ն է, օրինակ՝ 1 nL օգտագործվում է այս հետազոտության մեջ): Ասեղը պահեք մի զույգ սուր պինցետով և դրեք ասեղը ճիշտ դիրքում, որպեսզի ասեղը կարողանա սաղմի մեջ ներարկել 1 nL C-QDs լուծույթ և ապահովել լուծույթի բշտիկի չափը: Միկրոներարկման ասեղի պատրաստման քայլ առ քայլ ընթացակարգը կարելի է գտնել SI-ում:
Նանոմասնիկները կարող են սաղմի մեջ մտնել էնդոցիտոզով: Նախ, ընկղմումն օգտագործվել է C-QD-ներ զեբրաձկան սաղմերի մեջ ներմուծելու համար՝ ուսումնասիրելու ազդեցությունը սաղմնային զարգացման վրա և C-QD-ների պատկերավորման կիրառությունները: E3 միջավայրում լուծեք համապատասխան քանակությամբ C-QDs՝ տարբեր կոնցենտրացիաների 5 մլ C-QD լուծույթներ պատրաստելու համար: Ավելացրեք 5 մլ C-QDs լուծույթ վեց հորանի հարթ հատակով բջիջների կուլտուրայի ափսեի յուրաքանչյուր հորին (Նկար 7Ա): Զեբրաձկան քսան սաղմը տեղադրվեցին բջիջների կուլտուրայի ափսեի յուրաքանչյուր հորում և ներծծվեցին 5 մլ C-QD-ի տարբեր կոնցենտրացիաներ պարունակող միջավայրում (Նկար 7B): Թրջվելուց առաջ համոզվեք, որ սաղմը չի զարգացել չորս բջիջների փուլից այն կողմ, որը բեղմնավորումից 1 ժամ հետո է (hpf): Իդեալում, այս սաղմերը պետք է լինեն միաբջջային փուլում (0,5 hpf), որպեսզի ապահովվի, որ C-QD-ն կարող է ներթափանցել սաղմի մեջ և ցրվել սաղմով մեկ: 3 ժամ հետո սաղմերը երեք անգամ լվացվել են E3 միջավայրով՝ C-QD-ի ավելցուկը հեռացնելու համար: Սաղմերը մշակվել են E3 միջավայրում 28,5°C ջերմաստիճանում, մութ/լույս ցիկլով 10/14 ժամ: Կուլտուրայի միջավայրը փոխարինվում էր E3 միջավայրով ամեն օր առավոտյան 8:30-ին և 17:30-ին, իսկ E3 միջավայրը պարունակում էր օրական 0,003 wt: PTU կանխելու pigmentation եւ միջնորդել արտացոլման.
(A, B) C-QDs լուծույթում ներծծված սաղմերի տարբեր կոնցենտրացիաներ՝ 0.5, 1, 1.5, 2.5 և 5 մգ մլ-1: (C, D) Ձեռք բերեք զեբրաձկան սաղմերի պատկերներ: (E) Brightfield (վերին) և ֆլուորեսցենտային (ներքևի) պատկերներ զեբրաձկան սաղմերը 2,5 մգ մլ-1 C-QD-ում թրջելուց հետո: Կշեռքի բար, 1,0 մմ:
C-QD-ի տարբեր կոնցենտրացիաներով ներծծված սաղմերը տեղադրվեցին մեկ գոգավոր ապակե սլայդի գոգավոր մակերեսի վրա կաթիլիչի միջոցով և ընկղմվեցին E3 միջավայրում (Նկար 7C): Տեղադրեք ապակե սլայդը ֆլուորեսցենտային մանրադիտակի տակ և տեղադրեք սաղմը ֆլյուորեսցենտային մանրադիտակի միջոցով ֆլյուորեսցենտային պատկերման համար պատշաճ դիրքում (Նկար 7D): Բրայթֆիլդի և զեբրաձկան էմբրիոնների ֆլյուորեսցենտային պատկերները ստացվել են 10x ակնոցի և 4x օբյեկտիվ ոսպնյակի միջոցով (Նկար 7E): C-QD-ի տարբեր կոնցենտրացիաներով սաղմերի պատկերները հավաքվել են 3, 6, 12, 24, 48 և 60 hpf արագությամբ: Զեբրաձկան սաղմերի մեջ C-QD-ի ներմուծման քայլ առ քայլ գործընթացը կարելի է գտնել SI-ում:
Միկրոներարկումն օգտագործվել է ԴՆԹ-ի ներարկումից հետո տրանսգենիկ զեբրաձուկ արտադրելու համար, գենային նոքդաուն անտիսենս մորֆոլինոյի ներարկումից հետո, միկրոօրգանիզմների ներարկումից հետո վարակիչ հիվանդությունների ուսումնասիրման և քաղցկեղի բջիջների ներարկումից հետո ուռուցքի առաջընթացի ուսումնասիրման համար43: C-QD-ի միկրոներարկումն օգտագործվում է նկար S8-ում պատրաստված միկրոներարկիչի շահագործման քայլերը պատկերացնելու համար: 10 մգ C-QDs լուծեք 2 մլ գերմաքուր ջրի մեջ՝ ստանալու համար 5 մգ մլ-1 C-QDs լուծույթ, և նոսրացրեք գերմաքուր ջրով մինչև 2,5, 1,5, 1,0 և 0,5 մգ մլ-1 (նկ. 8Ա): Դասավորեք սաղմերը սլայդի կողքին՝ խողովակի միջոցով, որպեսզի ձևավորվի մեկ սյունակ (Նկար 8B): Քաշեք 2μLC-QDs լուծույթը նախապես միկրոպիպետտով գծված ասեղի մեջ: Խորիոնային մակերեսը ծակելուց և դեղնուցի ասեղը մտնելուց հետո, ոտնաթաթի վրա ոտնահարելով, միկրո ներարկիչի միջոցով սաղմի մեջ ներարկվում է 1 nL (ուլունքի տրամագիծը 0,12 մմ) C-QDs լուծույթ (Նկար 8C): Լուծույթը պետք է արագ և ճշգրիտ ներարկել դեղնուցի մեջ, որպեսզի սաղմերը կարողանան գոյատևել և աճել: Ներարկման ընթացքում պետք է խուսափել օդային փուչիկներից, քանի որ դրանք կարող են սպանել սաղմը: Նախքան միկրոներարկումը, համոզվեք, որ սաղմը չի զարգացել չորս բջիջների փուլից այն կողմ (1 hpf): Իդեալում, սաղմը պետք է լինի միաբջջային փուլում (0,5 hpf), որպեսզի ապահովի, որ C-QD-ն ցրված է սաղմով մեկ: Սաղմերի շարքը լրացնելուց հետո ներարկված սաղմերը անմիջապես տեղափոխեք մաքուր Պետրի ափսեի մեջ՝ մեղմ E3 միջավայրով, և սաղմերը ներարկեք ներարկված Պետրի ափսեով, որը պիտակավորված է C-QD կոնցենտրացիայով: Սաղմերը մշակվել են E3 միջավայրում 28,5°C ջերմաստիճանում 10/14 ժամ մութ/լույս ցիկլով: Կուլտուրայի միջավայրը փոխարինվում էր E3 միջավայրով ամեն օր 8:30-ին և 17:30-ին, իսկ E3 միջավայրը պարունակում էր 0,003 wt: PTU կանխելու pigmentation եւ միջնորդել արտացոլման. Միկրոներարկումով զեբրաձկան սաղմերում C-QD-ի ներդրման քայլ առ քայլ գործընթացը կարելի է գտնել SI-ում:
(Ա) տարբեր կոնցենտրացիաների C-QDs լուծույթներ միկրոներարկման փորձերի համար: (B) Սաղմերը կոկիկ դասավորված են Պետրիի ափսեի ապակե սլայդի կողքին (ներդիր. ընդլայնված սաղմի պատկեր): (C) C-QD-ն մանրադիտակի տակ միկրոներարկվում է սաղմի մեջ, մինչդեռ սաղմը և ասեղի ծայրը մեծանում են: Կշեռքի սանդղակը` 4,0 մմ:
Զեբրաձկան արագ զարգացումը հնարավորություն է տալիս ուսումնասիրել նանանյութերի բաշխումը, դեղորայքի զննումն ու ուսումնասիրել նանանյութերի թունավորությունը։ Զեբրաձկան թրթուրների պատկերումը, օգտագործելով C-QD որպես զոնդ, ցույց է տալիս գործողությունը և ընթացակարգերը: Զեբրաձկան սաղմերը աճեցրեք E3 միջավայրում 28,5°C ջերմաստիճանում 10/14 ժամ մութ/ֆոտոպերոդով մինչև թրթուրները դուրս գան (մոտ 72 ձիաուժ): Պատրաստվել են 2 մլ C-QDs լուծույթներ տարբեր կոնցենտրացիաներով (Նկար 9Ա): Ավելացրեք 2 մլ C-QD-ի և 5-7 զեբրաձկան թրթուրների տարբեր կոնցենտրացիաներ պարունակող կուլտուրական միջավայր 24 հորատանցքերի հարթ հատակով բջիջների կուլտուրայի ափսեի 6 հորերին (Նկար 9B): Թրթուրները աճեցվել են E3 միջավայրում 28,5°C ջերմաստիճանում 10/14 ժամ մութ/լույս ցիկլի համար: 10 ժամ հետո C-QDs լուծույթը փոխարինվել է E3 միջավայրով, և թրթուրները երեք անգամ լվացվել են E3 միջավայրով կաթիլիչով, որպեսզի հեռացնեն ավելորդ C-QD-ները:
(A, B) Մշակել 5-ից 7 zebrafish larvae (72 hpf) C-QDs լուծույթում տարբեր կոնցենտրացիաներով 24 հորատանցքի հարթ հատակով կուլտուրայի ափսեի 6 հորերից յուրաքանչյուրում: (C) Զեբրաձկան թրթուրները թրջում են 0,016% 3-ամինոբենզոատ մեթանսուլֆոնատ լուծույթով՝ դրանք անզգայացնելու համար: (D) Զեբրաձկան թրթուրները տեղադրվում են մեկ գոգավոր ապակե սլայդի գոգավոր մակերևույթի վրա՝ 3-ամինոբենզոատ մեթանսուլֆոնատի լուծույթը թրթուրների մեջ ընկղմված պահելու համար: (E) Ձեռք բերեք զեբրաձկան թրթուրների պատկերը: (F) Զեբրաձկան թրթուրների պայծառ դաշտը (վերին) և լյումինեսցենտային պատկերը (ներքևում)՝ ընկղմված 5 մգ մլ-1 C-QDs-ում: Կշեռքի բար, 1,0 մմ:
Մեջբերման մեթոդ՝ Kang, Y.-F. և այլն: Ածխածնային քվանտային կետեր զեբրաձկան ֆլուորեսցենտային պատկերման համար: Science Rep. 5, 11835; doi՝ 10.1038/srep11835 (2015):
Wang, Y., Li, Z., Wang, J., Li, J. & Lin, Y. Գրաֆեն և գրաֆենի օքսիդ. բիոֆունկցիոնալացում և դրա կիրառումը կենսատեխնոլոգիայում: Կենսատեխնոլոգիայի միտումները. 29, 205–212 (2011):
Mazumder, S., Dey, R., Mitra, MK, Mukherjee, S. & Das, GC Մեկնաբանություն. Կենսաֆունկցիոնալացված քվանտային կետեր կենսաբանության և բժշկության մեջ: Ջ. Նանո. 2009, 1-17 (2009):
Lee, KJ, Nallathamby, PD, Browning, LM, Osgood, CJ & Xu, XHN In vivo պատկերազարդումը առանձին արծաթի նանոմասնիկների փոխադրման և կենսահամատեղելիության վերաբերյալ զեբրաձկան սաղմերի վաղ զարգացման մեջ: Acs Nano 1, 133-143 (2007):
Jaiswal, JK, Mattoussi, H., Mauro, JM & Simon, SM օգտագործում են քվանտային կետերի բիոկոնյուգատներ կենդանի բջիջների երկարաժամկետ գունավոր պատկերման համար: Nat Biotechnology. 21, 47–51 (2003):
Zhang, YQ և այլն: N-doped ածխածնային կետերի մեկ կաթսայի սինթեզ՝ կարգավորելի լյումինեսցենտային բնութագրերով: J. Mater. Chemistry 22, 16714–16718 (2012):
Derfus, AM, Chan, WCW և Bhatia, SN ուսումնասիրում են կիսահաղորդչային քվանտային կետերի ցիտոտոքսիկությունը: Նանոլետ. 4, 11-18 (2004):
Բերա Դ., Քիան Լ., Ցենգ Թ.-Կ. & Holloway, PH քվանտային կետերը և դրանց բազմամոդալ կիրառությունները. Նյութ 3, 2260–2345 (2010):
Baker, SN և Baker, GA Լուսավոր ածխածնային նանոկետեր. առաջացող նանոլույսը: Անգյու. Chemical Interpretation Ed 49, 6726–6744 (2010):
Liu, CJ և այլն: Ածխածնի կետերի վրա հիմնված PEI պասիվացումը ուժեղացնում է գենային նանոկրիչները գեների առաքման և կենսաբանական պատկերման համար: կենսանյութեր. 33, 3604–3613 (2012):
Zhou Jianguo et al. Էլեկտրաքիմիական մոտեցում բազմապատ ածխածնային նանոխողովակներից (MWCNT) կապույտ լույս արձակող նանոբյուրեղներին: J. Am Chemical Soc. 129, 744–745 (2007):
Ding, C., Zhu, A. & Tian, ​​Y. C կետի ֆունկցիոնալ մակերևույթի ճարտարագիտություն լյումինեսցենտային կենսազգայման և in vivo կենսապատկերման համար: Կուտակային քիմիական ռեզ. 47, 20-30 (2014):
Wang, J., Wang, CF & Chen, S. Ամֆիֆիլային ձվերից ստացված ածխածնային կետեր. արագ պլազմայի արտադրություն, պիրոլիզի գործընթաց և բազմագույն տպագրության նախշեր: Անգյու. Chemical Interpretation Ed 51, 9297-9301 (2012):
Zhao, QL և այլն: Գրաֆիտի էլեկտրաօքսիդացման միջոցով հեշտությամբ պատրաստեք լյումինեսցենտ ածխածնային նանոբյուրեղներ ցածր ցիտոտոքսիկությամբ: Chemical Community 44, 5116-5118 (2008):
Liu, HP, Ye, T. & Mao, CD Լյումինեսցենտ ածխածնային նանոմասնիկներ, որոնք ստացվում են մոմի մուրից: Անգյու. Chemical Interpretation Ed 46, 6473–6475 (2007):
Ray, SC, Saha, A., Jana, NR & Sarkar, R. «Լյումինեսցենտ ածխածնի նանոմասնիկներ. սինթեզ, բնութագրում և կենսապատկերման կիրառություններ»: J. Physical Chemistry C 113, 18546-18551 (2009):
Երբ, QQ և այլն: Բարձր եկամտաբերություն, բարձր լուծելիություն ազոտով պարունակվող ածխածնի կետեր. ձևավորում, ֆլյուորեսցենտային մեխանիզմ և պատկերային կիրառություններ: RSC Առաջընթաց 4, 1563-ից մինչև 1566 (2014):
Wei, WL և այլն: Ոչ ֆերմենտային դիֆուզիոն ռեակցիա. ազոտով ներծծված ածխածնային կետեր արտադրելու ընդհանուր միջոց՝ կարգավորելի բազմագույն լյումինեսցենտային էկրաններով: Science Rep. 4, 3564 (2014):
Li, HT և այլն: Ջրում լուծվող ածխածնային նանոմասնիկների մեկ քայլ ուլտրաձայնային սինթեզ՝ գերազանց ֆոտոլյումինեսցենտային հատկություններով: Carbon 49, 605–609 (2011):
Qu, Q., Zhu, A., Shao, X., Shi, G. & Tian, ​​Y. Մշակել ածխածնային քվանտային կետերի վրա հիմնված լյումինեսցենտ Cu2 + զոնդեր, որոնք հարմար են կենդանի բջիջների պատկերման համար: Քիմիական համայնք 48, 5473-5475 (2012):
Xu, Y. Սպասեք: Ազոտով ներկված ածխածնային կետեր. պատրաստման պարզ և համընդհանուր մեթոդ, ֆոտոլյումինեսցենտային հետազոտություն և պատկերավորման կիրառություններ: Քիմիա Եվրո. J.19, 2276-2283 (2013):
Դոնգ, Յ. Սպասիր: Ածխածնի վրա հիմնված կետերը համակցված են ազոտի և ծծմբի հետ՝ հասնելու բարձր քվանտային ելքի և արտանետումների՝ անկախ գրգռումից: Անգյու. Chemical Interpretation Ed 52, 7800-7804 (2013):
Լյու, Ռ. Սպասեք: Ջրային մոտեցում բազմագույն ֆոտոլյումինեսցենտ ածխածնի կետերին՝ օգտագործելով սիլիցիումի գնդակներ որպես կրող: Անգյու. Chemical Interpretation Ed 121, 4668–4671 (2009):
Յանգ, ՍՏ և այլն: Ածխածնային կետեր մարմնի օպտիկական պատկերման համար: J. Am Chemical Soc. 131, 11308-11309 (2009):
Ko, SK, Chen, X., Yoon, J. & Shin, I. Zebrafish ողնաշարավորների լավ մոդելներ են մոլեկուլային պատկերման համար՝ օգտագործելով լյումինեսցենտային զոնդերը: Քիմիական սոց. Rev. 40, 2120–2130 (2011):
Westerfield, M. Zebrafish Գիրք. Zebrafish (Danio rerio), Էդինբուրգի լաբորատոր օգտագործման ուղեցույց: Թիվ 4 (University of Oregon Press, Eugene; 2000):
Weber, T. & Köster, R. Զեբրաձկան թրթուրների բազմագույն պատկերավորման գենետիկ գործիք: Մեթոդ 62, 279–291 (2013):
Howe, KC և այլն: Zebrafish հղումների գենոմի հաջորդականությունը և դրա կապը մարդու գենոմի հետ: Nature 496, 498–503 (2013):
Kettleborough, RNW և այլն: Զեբրաձկան սպիտակուցը կոդավորող գենային ֆունկցիայի գենոմային համակարգված վերլուծություն: Nature 496, 494–499 (2013):
Լյու, Յ. Սպասեք: Նանոմասնիկների թունավորության նկատմամբ զեբրաձկան զգայունությունը գնահատելու աստիճանական մեթոդ: Integer Biology 4, 285-291 (2012):
Wang, Y., Seebald, JL, Szeto, DP and Irudayaraj, J. Մակերեւութային բարելավված Raman ցրող նանոպրոբների կենսահամատեղելիություն և կենսաբաշխում զեբրաձկան սաղմերում. in vivo և մուլտիպլեքսային պատկերավորում: Acs Nano 4, 4039–4053 (2010):
Kimmel, CB, Ballard, WW, Kimmel, SR, Ullmann, B. & Schilling, TF zebrafish-ի սաղմնային զարգացման փուլերը: Մշակող Dynam. 203, 253–310 (1995):
Վու, Մ. Սպասեք: Գլիկոզիլով ձևափոխված դիպորֆիրինն օգտագործվում է in vitro և in vivo ֆլուորեսցենտային պատկերման համար: Chembiochem 14, 979–986 (2013):
Nallathamby, PD, Lee, KJ & Xu, XHN-ը մշակել են կայուն և միատեսակ մեկ նանոմասնիկի ֆոտոնիկա՝ զեբրաձկան սաղմի հեղուկ նանոմիջավայրի in vivo դինամիկ պատկերման համար: Acs Nano 2, 1371–1380 (2008):
Լյու, Մ. Սպասեք: In vivo եռաչափ երկակի ալիքի ֆոտոակուստիկ տոմոգրաֆիա հեռահար կարմիր ֆլուորեսցենտային սպիտակուցի E2-մուգ կարմիր արտահայտված չափահաս զեբրաձկան մեջ: Կենսաբժշկական գիտություն. ընտրել. Էքսպրես 4, 1846–1855 (2013).
Պարկ, Ջեյ Վեյթ: Բարձր հաճախականության ֆոտոակուստիկ պատկերացումն օգտագործվում է զեբրաձկան սրտի արյան հոսքը in vivo պատկերացնելու համար: ընտրել. Էքսպրես 21, 14636-14642 (2013):
Umemoto, N. Սպասեք: Զեբրաձկան գենային նոկաուտի և սրտի ֆունկցիոնալ պատկերման ֆլյուորեսցենցիայի վրա հիմնված մեթոդներ: Lol biotech. 55, 131–142 (2013):
Xi, Y., Chen, D., Sun, L., Li, Y. & Li, L. Զեբրաձկան մուտանտների բնութագրումը ոսկրային կալցիֆիկացման արատներով զարգացման ընթացքում: Կենսաքիմիական. Կենսագրություն Res. Co.440, 132–136 (2013):
Ռամեշ, Ռ. Սպասեք: Փոփոխություններ հակաօքսիդանտ ֆերմենտների և ԴՆԹ-ի վնասում SiO2 նանոմասնիկների մեջ, որոնք ենթարկվում են զեբրաձկան: շրջապատը։ Մոնիթ. Գնահատում. 185, 5873–5881 (2013):
Deniz Koç, N. & Yüce, R. Զեբրաձկան սկզբնական սեռական բջիջների օպտիկական և էլեկտրոնային մանրադիտակի ուսումնասիրություններ (Danio rerio): Biology Res. 45, 331–336 (2012):
Իսպանիա, HP և այլն: Զեբրաձկան սաղմերի ռոբոտների ներարկում՝ հիվանդության մոդելների բարձր թողունակության զննման համար: Մեթոդ 62, 246–254 (2013):
Xu, X. Սպասեք: Էլեկտրոֆորեզի վերլուծություն և լյումինեսցենտ միապատի ածխածնային նանոխողովակների բեկորների մաքրում: J. Am Chemical Soc. 126, 12736-12737 (2004):
Xu, Y. Սպասեք: Ածխածնի կետերի և ածխածնի օքսիդի կետերի կրճատում. հետազոտություն ֆոտոլյումինեսցենտության և էլեկտրաքիմիլյումինեսցիայի վերաբերյալ հատուկ կիրառությունների համար: Քիմիա Եվրո J.19, 6282-6288 (2013):
Xu, Y. Սպասեք: 13C-ի կողմից նախագծված ածխածնային քվանտային կետերը կարող են օգտագործվել in vivo մագնիսական ռեզոնանսի և ֆլուորեսցենտության երկակի ռեակցիաների համար: Վերլուծաբան 139, 5134-5139 (2014 թ.):
Teng, X. և այլն: Konjac ալյուրը օգտագործվում է ազոտով պարունակվող ածխածնի կետերը սինթեզելու համար Fe3 + և L-լիզինի «միացված-անջատված» լյումինեսցենտ կանաչի միջոցով կենսաբանական պատկերման համար: J. Mater. Chemistry B 2, 4631–4639 (2014).
Ma, Z., Ming, H., Huang, H., Liu, Y. & Kang, Z. N-doped fluorescent carbon dots-ի մեկ քայլ ուլտրաձայնային սինթեզը գլյուկոզայում և դրանց տեսանելի լուսազգայուն ֆոտոկատալիտիկ կարողությունը: Նյու Ջ. Chemistry 36, 861–864 (2012):
Wang, W. Սպասեք: Ջրի լուծվող և բիոհամատեղելի լյումինեսցենտ ազոտով պարունակվող ածխածնային կետերի պարզ սինթեզ՝ բջջային պատկերման համար: Analyst 139, 1692–1696 (2014):
Zhang, R. & Chen, W. Ազոտով պարունակվող ածխածնային քվանտային կետեր. հեշտ է սինթեզվել և օգտագործել որպես «անջատված» լյումինեսցենտային զոնդեր՝ Hg2 + իոնները հայտնաբերելու համար: Biosen. Կենսաէլեկտրոնիկա. 55, 83–90 (2014):
Handy, R., Henry, T., Scown, T., Johnston, B. & Tyler, C. Արտադրված նանոմասնիկներ. դրանց կլանումը և ազդեցությունը ձկան մեխանիզմների վերլուծության վրա: Էկոտոքսիկոլոգիա 17, 396–409 (2008):
Reddy, ER, Banote, RK, Chatti, K., Kulkarni, P. & Rajadurai, MS օգտագործում են լյումինեսցենտ օրգանական նանոմասնիկներ՝ զեբրաձկան մկանային մանրաթելերի ընտրովի բազմերանգ պատկերում կատարելու համար: Chembiochem 13, 1889-1894 (2012):
Լյու, Յ. Սպասեք: Նանոմասնիկների թունավորության նկատմամբ զեբրաձկան զգայունությունը գնահատելու աստիճանական մեթոդ: Integer Biology 4, 285-291 (2012):
Նա, Ն. Սպասեք: Հետազոտել բիսմութ-ասպարագին կոորդինացիոն պոլիմերների թունավորությունը զեբրաձկան սաղմերի վաղ զարգացման վրա: Chemical Res. թույն. 26, 89-95 (2013):
Yeo, MK & Kang, M. CuxTiOy նանոմասնիկների ազդեցությունը կենսաբանական թունավորության վրա զեբրա ձկան սաղմի առաջացման ժամանակ: Քիմիայի կորեական ամսագիր. 26, 711–718 (2009):
Kim, MS և այլն: Ցիտրատով ֆունկցիոնալացված TiO2 նանոմասնիկներն օգտագործվել են՝ ուսումնասիրելու համար մասնիկների չափի ազդեցությունը զեբրաձկան սաղմի թունավորության վրա: Վերլուծաբան. 139, 964–972 (2014):
Այս աշխատանքը աջակցվել է Չինաստանի ազգային հիմնական հետազոտական ​​ծրագրի (973 ծրագիր, No. 2011CB707703), Չինաստանի բնական բնական գիտությունների ազգային հիմնադրամի (թիվ 21375064 և 81301080), Չինաստանի ազգային հիմնական տեխնոլոգիական հետազոտությունների և զարգացման ծրագրի կողմից (թիվ 2012BAI08B06), և հետազոտական ​​հիմնադրամը։ Բարձրագույն կրթության դոկտորական ծրագիր (թիվ 20130031110016).
Վերլուծական գիտական ​​հետազոտական ​​կենտրոն, Քիմիայի դպրոց, Նանկայի համալսարան, Տյանցզին կենսազգայման և մոլեկուլային ճանաչման առանցքային լաբորատորիա, բժշկական քիմիական կենսաբանության պետական ​​հիմնական լաբորատորիա և քիմիական գիտության և ճարտարագիտության համագործակցային նորարարական կենտրոն (Տյանցզին), Տյանցզին 300071
Ուռուցքների միկրոմիջավայրի և նյարդաանոթային կարգավորման Tianjin Key Laboratory of Medicine School, Nankai University, Tianjin 300071, Չինաստան
XBY-ը մտահղացել և նախագծել է այս հետազոտությունը: XBY-ն վերահսկում էր այս աշխատանքը: YFK, YHL, YWF, YX և XMW փորձեր են անցկացրել: XBY, YFK և YHL վերլուծել են տվյալները: XBY-ը և YFK-ն գրել են այս փաստաթուղթը: Բոլոր հեղինակները քննարկել են արդյունքները և մեկնաբանել ձեռագիրը, իսկ ձեռագիրն արտացոլում է բոլոր հեղինակների ներդրումները:
Այս աշխատանքը լիցենզավորված է Creative Commons Attribution 4.0 Միջազգային Լիցենզիայի Համաձայնագրի ներքո: Այս հոդվածի նկարները կամ երրորդ կողմի այլ նյութերը ներառված են հոդվածի Creative Commons արտոնագրում, եթե վարկային գծում այլ բան նշված չէ. հակառակ դեպքում, եթե նյութը ներառված չէ Creative Commons լիցենզիայում, օգտագործողը պետք է ստանա միայն լիցենզիայի տիրոջ թույլտվությունը՝ նյութը պատճենելու համար: Այս լիցենզիայի պատճենը դիտելու համար այցելեք https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
Kang Yufen, Li Yuhua, Fang Yuwen. Սպասեք։ Ածխածնային քվանտային կետեր զեբրաձկան ֆլուորեսցենտային պատկերման համար: Sci Rep 5, 11835 (2015): https://doi.org/10.1038/srep11835
Ուղարկելով մեկնաբանություն՝ դուք համաձայնում եք պահպանել մեր պայմանները և համայնքի ուղեցույցները: Եթե ​​դուք վիրավորական կամ անհամապատասխան վարք եք գտնում մեր պայմաններին կամ ուղեցույցներին, նշեք այն որպես անպատշաճ: